首页 > 文献资料
-
钉螺酚氧化酶分子质量测定
目的 初步测定并分析钉螺酚氧化酶天然蛋白的分子质量及其亚基组成. 方法 通过匀浆、离心取得钉螺粗制酚氧化酶酶液,经盐析、透析、凝胶过滤等方法纯化酚氧化酶,并采用凝胶柱层析法和SDS-PAGE测定酚氧化酶的分子质量,测算其亚基组成. 结果 凝胶柱层析法初步测得钉螺酚氧化酶分子质量单位为91 ku,SDS-PAGE 4条主带分别位于87、40、37和33 ku. 结论 钉螺体内酚氧化酶分子质量单位约为87～91 ku,可能为单体酶或由3个分子质量介于33～40 ku的亚基构成的寡聚酶.
-
EDTA与金属离子对钉螺酚氧化酶活性的影响
目的 探讨EDTA与金属离子对钉螺酚氧化酶活性的影响.方法 将钉螺软体匀浆、离心获取粗制酶液,再经盐析、透析及凝胶过滤层析得到部分纯化的酚氧化酶制剂.以在测活系统中分别加入不同浓度的EDTA、NaCl、KCl、Na2SO4、K2SO4、CuSO4、CaSO4、ZnSO4及MgSO4,以邻苯二酚为底物测定PO活性,计算相对活力.结果 Na+和K+对钉螺酚氧化酶活性既无抑制作用也无增强效应;各浓度的EDTA对钉螺酚氧化酶活性均有明显抑制作用;Zn2+对该酶活性亦有抑制作用,但较EDTA弱;Mg2+和Ca2+有增强酶活性作用,低浓度Cu2+可提高酶活性,高浓度Cu2+则可降低酶活性,其IC50为0.57 mmol/L.结论 EDTA及多种金属离子均可影响钉螺酚氧化酶活性,为研发以该酶为靶标的新型灭螺剂提供了理论基础.
-
寄生虫酚氧化酶的研究进展
酚氧化酶(Phenol oxidse,PO)广泛存在于无脊椎动物、脊椎动物、植物、细菌和真菌等生物体内,人们已从多种动物体提取纯化并鉴定了PO.依据PO的不同,其分子质量、适温度、适pH、激活剂、抑制剂和催化功能均有所不同.本文就寄生虫酚氧化酶的命名、生化特性、组织学定位、生理功能和分子生物学等方面的研究进展作以下综述.
-
免疫刺激剂对湖北钉螺酚氧化酶活性的影响
目的 实验研究几种常见的免疫抑制剂与激动剂对湖北钉螺酚氧化酶活性的影响.方法 将实验钉螺置于4组免疫刺激剂植酸、维生素C、β-葡聚糖、脂多糖及去氯水对照组中浸泡60 min,去壳,取软体组织通过匀浆、离心分别获取粗制酶液,以邻苯二酚为底物用比色法测定各组酶活力,结果进行统计学分析.结果 对照组各时间段与0h间比较,差异均无统计学意义(F=2.10,P＞0.05);植酸和维生素浸泡后各时间段与对照组比较酚氧化酶(PO)活力下降(P＜0.05),随着时间的延长活力逐渐下降,β-葡聚糖和脂多糖处理后PO活力上升(P＜0.05),且随着时间的延长PO活力为逐渐上升.结论 免疫刺激剂植酸、维生素C会引起钉螺PO活力下降,而β-葡聚糖和脂多糖使PO升高.
-
96孔酶标板法检测家蝇血淋巴黑化反应的初步研究
目的 探讨用96孔酶标板法检测家蝇血淋巴黑化反应的可行性.方法 用大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌单菌和大肠埃希菌与金黄色葡萄球菌混合菌分别体外刺激家蝇3龄幼虫的血淋巴,通过96孔酶标板法分析菌刺引起的家蝇幼虫血淋巴酚氧化酶活性的变化,进一步探讨菌刺与家蝇黑化反应的关系.结果 相比正常对照的起始A490值,1～3号样品的起始A490值随加菌量的增多依次递增,其增幅分别为大肠埃希菌1.33～1.38倍,金黄色葡萄球菌1.30～2.40倍,藤黄微球菌2.60～3.00倍,大肠埃希菌与金黄色葡萄球菌混合菌1.40～3.80倍.显然,菌刺可使家蝇血淋巴酚氧化酶活性增高,菌刺浓度越大,黑化反应越强,单菌刺激的效果依次为藤黄微球菌＞金黄色葡萄球菌＞大肠埃希菌,大肠埃希菌与金黄色葡萄球菌混合菌刺激的效果要比单菌好.结论 用96孔酶标板法检测菌刺家蝇血淋巴黑化反应的变化可行.
-
日本血吸虫酚氧化酶诱导免疫对小鼠保护性的初步研究
目的观察日本血吸虫酚氧化酶的抗原性和诱导宿主抗血吸虫病的免疫保护性作用.方法将含酚氧化酶的上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)后,分别在两侧切取胶宽约1 cm进行酶染色,然后准确切下相应的未染色的凝胶.经真空冷冻干燥机冻干后碾成粉末,高速电动匀浆成浆糊状,冷浸过夜.高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗抗原.设立3组进行保护性免疫实验:A组(实验组)、B组(佐剂对照组)和C组(空白对照组).初次免疫后第2、4周,各重复1次加强免疫,后1次免疫后10 d按常规收集各组免疫血清.常规ELISA法测定免疫血清效价.然后用新鲜逸出尾蚴(40±1)条/鼠进行攻击感染.6周后,收集成虫计数,常规计算减虫率并检测肝脏虫卵负荷.结果ELISA法测定的酚氧化酶免疫小鼠血清效价在1:1 200以上.日本血吸虫酚氧化酶粗抗原免疫小鼠,其雌虫、雄虫和总虫数的减虫率分别为53.27%、26.76%和39.53%,与C组相比,差异均有极显著意义(P＜0.01).A组减卵率为50.75%,与C组相比,差异有极显著意义(P＜0.01).结论日本血吸虫酚氧化酶具有抗原性,能诱导宿主抗血吸虫感染免疫保护作用.其诱导保护性免疫的机制尚待进一步研究.
-
日本血吸虫酚氧化酶的电泳及酶活性的研究
目的观察日本血吸虫成虫酚氧化酶(phenol oxidase,PO)的酶谱及其活性.方法将42 d活成虫置含0.05%戊巴比妥钠的RPMIl640培养基中23℃孵育8 h后,分别收集雌、雄成虫,匀浆、超声粉碎、高速离心取上清(含PO),再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及酶染色后分析其酶谱;同时在紫外分光光度计下检测前后2个时点的A488值(A1,A2),PO活性相对值=(A2-A1)/(min@mg样品蛋白),其活性值用每分钟每毫克蛋白A48s变化值表示.设立酚酶抑制剂(丙烯基硫脲)组,在该组成虫匀浆上清中预先加入丙烯基硫脲以观察其对酚氧化酶活性的抑制效果.结果雌虫及雄虫均表现为迁移率相同的一条主带;但雄虫的酶带显色反应比雌虫弱.日本血吸虫雌虫及雄虫的酚氧化酶相对活性分别为0.165 min-1@mg-1和0.080 5 min-1@mg-1;加入酚酶抑制剂后,酶活性被明显抑制.终浓度为5 mmol的丙烯基硫脲对成虫酚酶活性的抑制率为85.03%.当丙烯基硫脲终浓度达25 mmol时,酚酶活性被完全抑制.结论不仅雌性成虫含有日本血吸虫酚氧化酶,而且雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同.雄性成虫含有的少量酚氧化酶的生理意义有待于进一步研究.
-
寄生虫酚氧化酶研究进展
酚氧化酶广泛存在于无脊椎动物、脊椎动物、植物、细菌和真菌等生物体内,它不仅参与寄生虫卵卵壳的形成,还通过多种方式参与寄生虫的防御反应.近年来,国内外研究者对寄生虫酚氧化酶的研究较多,该文就寄生虫酚氧化酶生理作用、生物学定位、调控机制等研究作一综述.
-
斯氏按蚊血淋巴酚氧化酶与约氏疟原虫卵囊黑化的关系
[目的]探讨酚氧化酶(phenoloxidase,PO)与疟原虫卵囊黑化的关系.[方法]以斯氏按蚊/约氏疟原虫为模型,对4组斯氏按蚊(不吸血组、吸正常血组、吸感染血组和硝喹组)血淋巴进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和凝胶图像分析,检测单酚氧化酶(monophenoloxidase,MPO)和二酚氧化酶(diphenoloxidase,DPO)活性.[结果]吸正常血组和不吸血组蚊血淋巴中MPO及.O-DPO活性无明显差异;与吸正常血组或不吸血组相比,感染组MPO及o-DPO活性无明显变化,但用药组d10则显著增加,d15显著降低.[结论]斯氏按蚊血淋巴中PO活性变化与约氏疟原虫卵囊黑化在时间上一致.
-
两性霉素B合并氟康唑对体外培养新生隐球菌酚氧化酶的影响
目的:研究两性霉素B合并氟康唑对体外培养新生隐球菌酚氧化酶活性的影响.方法:Novozyme 234酶消化法获取原生质体;冷冻玻璃珠粉碎原生质体;Polecheck法测定酚氧化酶活性.结果:两性霉素B合并氟康唑组的新生隐球菌酚氧化酶活性较空白对照组明显降低(P＜0.001),但在大于和接近低抑菌浓度上限的组间无明显差异.结论:两性霉素B合并氟康唑可降低新生隐球菌酚氧化酶活性,在大于或接近低抑菌浓度上限时与药物浓度无关.
-
氟康唑对新生隐球菌酚氧化酶活性的影响
新生隐球菌作为一种条件致病菌日益受到重视.黑素是新生隐球菌重要的致病因子之一,在新生隐球菌黑素合成过程中,酚氧化酶起着关键性的作用,是催化产生黑素的惟一酶类,并且酚氧化酶的含量影响着黑素的产生.有动物实验研究证实,酚氧化酶本身有保护新生隐球菌抵抗肺吞噬细胞的作用.这都说明了酚氧化酶对新生隐球菌的重要性.Liu等[1]报道在小鼠神经系统感染中酚氧化酶扮演了重要角色.氟康唑在体外有很高的抗菌活性,是治疗隐球菌病的有效药物,不易产生耐受性.本实验旨在揭示氟康唑对新生隐球菌酚氧化酶活性的影响.
-
湖北钉螺体内酚氧化酶及其组织学定位
目的 了解湖北钉螺体内是否存在酚氧化酶(PO),并观察其在钉螺体内分布情况.方法 酶组织化学染色法:湖北钉螺成螺(雄螺和雌螺)采自芜湖江滩,解剖后,将软体组织置含25 mmol/L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中,37 ℃孵育,体视显微镜下观察PO与底物反应后的产物在螺体内的分布情况.荧光组织化学染色法:解剖后的湖北钉螺成螺软体组织置含25 mmol/L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液(pH 6.8 )中,37 ℃孵育30 min,吸去邻苯二酚,加入0.05%戊巴比妥钠溶液,5 min后置荧光显微镜下观察PO催化产生的荧光物质在螺体内的分布情况. 结果 酶组织化学染色法显示钉螺的肝脏初为淡浅灰色,5 min时呈现浅灰色,15 min时呈现灰色,30 min时呈现黑色.荧光组织化学染色法显示钉螺的肝脏表面呈现荧光反应.结论 湖北钉螺体内存在PO,雌、雄螺体内的PO均定位于肝脏.
-
日本血吸虫酚氧化酶抗原诱导免疫对病鼠肝脏病理变化的影响
目的观察日本血吸虫酚氧化酶天然蛋白抗原诱导免疫对病鼠肝脏的病理变化.方法将42 d活成虫置于含0.05%戊巴比妥钠的RPMI 1640培养基中孵育8 h后洗净,匀浆,超声粉碎、低温高速离心,将含酚氧化酶的上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,嗣后分别在两侧切取胶宽约1 cm进行酶染色,解剖刀准确切下相应的未染色的凝胶.冻干后碾成粉末,高速电动匀浆成浆糊状,冷浸过夜.高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗抗原.设立3组进行免疫实验:实验组、佐剂对照组和空白对照组.初次免疫后第2、4周,各重复1次加强免疫,后1次免疫10 d后用新鲜逸出尾蚴(40±1)条/鼠进行攻击感染.42 d剖杀动物,观察日本血吸虫感染小鼠肝脏的病理变化.结果与对照组相比,酚氧化酶免疫实验组小鼠肝脏表面较光滑,隐约可见少量灰白色小点,肝色泽略带灰色,质地较软;压片观察小鼠肝脏内虫卵集聚数量明显减少,且以未成熟虫卵为主.肝脏内伴少量肝细胞坏死,细胞浸润不明显,可见较多未成熟卵周围无肉芽肿反应.小鼠肝组织内虫卵肉芽肿的平均直径和面积比对照组小鼠肝组织内虫卵肉芽肿的平均直径和面积明显减小,两组间差异有非常显著性(P<0.01).结论日本血吸虫酚氧化酶蛋白具抗原性,能诱导宿主一定的抗血吸虫病的免疫保护性作用.
-
日本血吸虫酚氧化酶天然蛋白分子特征的初步分析
目的初步分析日本血吸虫酚氧化酶(pheno1 oxidase,PO)天然蛋白分子的分子量及其亚基组成.方法将42 d龄活成虫置于含0.05%戊巴比妥钠的RPMI 1640培养基中23 C孵育8 h后,PBS(pH 6.8)洗净,分离雌、雄成虫,研磨呈匀浆,超声粉碎、低温高速离心,取上清(含PO)进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),分别在两侧切取胶宽约1 cm进行酶染色,然后用解剖刀准确切下相应的未染色的凝胶.经真空冷冻干燥机冻干后碾成粉末,高速电动匀浆成浆糊状,冷浸过夜,高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗蛋白,进行SDS-PAGE.利用SDS-PAGE与PAGE(点加1孔预染Mark蛋白)的结果,对照分析酚氧化酶蛋白的可能分子量及其亚基组成.结果 PAGE:日本血吸虫雌虫、雄虫酚氧化酶蛋白均表现为迁移率相同的1条主带,其对应分子量大约为81 kD.SDSPAGE:酚氧化酶粗蛋白共出现5条带,分别为81、64、54、41 kD和27 kD.结论初步分析日本血吸虫雌、雄成虫酚氧化酶天然蛋白分子的分子量及其亚基组成基本相同,可能为单体酶(分子量81kD)或由3个27 kD相同亚基构成的同聚体.其确切的分子特征有待于进一步研究.
-
日本血吸虫酚氧化酶的组化定位研究
目的观察酚氧化酶(phenol oxidase,PO)在日本血吸虫成虫的组织学分布.方法酚氧化酶组化方法:将42 d虫龄的日本血吸虫活成虫置含25 mmol/L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中,37℃孵育30 min后,转移虫体至载玻片上,吸去虫体表面液体,将其中一部分虫体置Olym-pus显微镜下观察酚氧化酶在虫体的组织学分布.荧光组织化学方法:经上述过程处理后,在另一部分虫体上滴加2滴含0.05%戊巴比妥钠的PBS溶液,然后置Leica荧光显微镜下观察酚氧化酶在虫体的组织学分布.结果酶组织化学方法显示,日本血吸虫酚氧化酶仅分布于雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳表面,呈现棕褐色显色反应;雌虫卵巢和雄虫均未发现酚氧化酶活性.然而,荧光组织化学方法显示,酚氧化酶除主要分布于雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳表面,呈现强荧光外,还少量分布于雄虫体壁表层,呈现弱荧光反应.结论不仅日本血吸虫雌虫含有酚氧化酶活性,而且雄虫也含酚氧化酶活性,只不过其含量少、活性低.荧光组织化学方法能更灵敏地显示日本血吸虫酚氧化酶活性,更适用于日本血吸虫酚氧化酶的组织学定位.
-
氯硝柳胺对钉螺酚氧化酶活性的影响
目的 探讨氯硝柳胺对钉螺体内酚氧化酶活性的影响.方法 利用酶生物化学技术,以邻苯二酚为底物,测定并比较经0.1、0.5 mg/L和1.0 mg/L的氯硝柳胺浸泡0、12、24、48 h后的钉螺体内酚氧化酶的活性,并设无氯清水浸泡作为对照组.结果 经0.1、0.5 mg/L和1.0 mg/L的氯硝柳胺浸泡0、12、24、48 h后的钉螺体内酚氧化酶的活性分别为181.60±4.39、150.43±3.52、102.07±2.12、73.77±1.98 U/g,178.17±2.37、128.13±2.54、86.5±1.35、48.63±2.32 U/g和181.60±2.09、105.07±3.89、66.07±2.54、33.53±2.34 U/g.清水对照组浸泡0、12、24、48 h后的钉螺体内酚氧化酶的活性分别为183.47±3.25、182.07±2.27、182.63±4.91 U/g和182.10±2.95 U/g.经统计学分析,清水对照组各时间段及各组0 h间比较,差异均无统计学意义(P均＞0.05).各组分别与同时间段清水对照组比较以及各组不同时间段与本组0 h活性间比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 氯硝柳胺杀灭钉螺的作用机制之一可能与降低钉螺体内酚氧化酶活性有关.
-
湖北钉螺酚氧化酶组织化学定位进一步研究
目的 观察酚氧化酶(PO)在日本血吸虫中间宿主湖北钉螺体内的组织学分布.方法 湖北钉螺成螺采自芜湖江滩,解剖后取无损伤软体组织整体,用冰冻切片定位法作连续切片,置于含25 mmol/L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液(pH 6.8)中,温箱37℃孵育30 min后系统观察酚氧化酶与底物反应后的产物在螺体内的分布情况.结果 光学显微镜下显示在钉螺体内的肝脏、外套膜、头足部、触角、腮叶等处都出现酶组织化学反应的黑色阳性颗粒.结论 钉螺体内存在酚氧化酶,其分布于钉螺的肝脏、外套膜、头足部、触角、腮叶等组织.
-
新生隐球菌酚氧化酶的研究进展
近年来,新生隐球菌作为一种条件致病菌日益受到重视,有关的基础和临床研究已取得了较大的进展,特别是在其毒性因子方面.现有的研究证明酚氧化酶是新生隐球菌的重要毒性因子之一.从酚氧化酶合成的影响因素,分子特性,基因调控,可能的致病机理等方面的研究现状进行综述.
-
两性霉素B对新生隐球菌酚氧化酶活性的影响
新生隐球菌作为一种重要条件致病菌日益受到重视,黑素是新生隐球菌重要的致病因子之一,在新生隐球菌黑素合成过程中,酚氧化酶起着关键性的作用,是催化产生黑素的惟一酶类,并且酚氧化酶的含量影响着黑素的产生.
-
钉螺酚氧化酶活性的初步研究
目的 初步探讨日本血吸虫惟一中间宿主钉螺体内酚氧化酶的生化活性.方法 解剖健康成年钉螺,剔除外壳,将其分为雄性组、雌性组及雌雄混合组(雌雄重量相等),匀浆离心取上清为待检酶液.以邻苯二酚为底物通过比色法检测钉螺酚化酶在pH 6.8、28℃条件下三组酶活力并予比较;用同法分别测定三组在不同pH(恒温28℃)及不同温度(pH 6.8)下的酚氧化酶活力,绘制变化曲线,确定该酶活性适pH和适温度.通过Lineweaver-Burk双倒数作图法和Arrhenius公式求得各组酶活化能并以比较.结果 在pH 6.8、28℃条件下,雄性组、雌性组及混合组的酶活力分别为188.2±5.7、183.8±5.5及185.2±6.7(U/g),经方差分析,三组酶活力无显著差异.三组酚氧化酶的活性在不同pH及温度下的变化趋势无显著差异;pH为6.0、温度为40℃时,三组的酚氧化酶活性均高.三组活化能分别为32.6±5.1、31.7±2.9及32.1±3.3(kJ/mo1),经方差分析亦无显著差异.结论 钉螺酚氧化酶活性及活化能均无性别差异,其催化邻苯二酚的适pH及适温度分别为6.0和40℃.
