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登革2型病毒贵州分离株NS1部分基因原核表达蛋白及其多克隆抗体制备
目的 原核表达、纯化DENV-2贵州分离株NS1部分序列表达蛋白,并制备其多克隆抗体以研究其功能.方法 合成DENV-2 M株NS1部分基因序列,克隆到原核表达载体pET28(a),转化大肠埃希菌BL21 (DE3)；用IPTG诱导表达,Ni柱亲和层析纯化、回收融合蛋白；用纯化融合蛋白免疫BALB/c鼠,制备多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价.结果 原核表达了NS1部分序列融合蛋白,并获得了其多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1∶800.Western blot检测该蛋白能被His标签抗体识别.结论 DENV-2M株NS1部分序列表达蛋白可诱导小鼠产生较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究DENV-2M株NS1部分序列表达蛋白的免疫原性奠定了基础.
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侵袭性大肠埃希菌IpaC的表达和纯化与检验学研究
目的 研究分析侵袭性大肠埃希茵的发病机制,表达和纯化侵袭性大肠埃希茵毒力蛋白IpaC与临床意义.方法 将含有ipaC基因的pET32a-ipaC表达质粒载体转化大肠杆菌BL21(λDE3),在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,对诱导后的表达产物进行SDS-PAGE鉴定,并采用QIAexpressionitsTM蛋白纯化系统纯化目的蛋白.结果 诱导后的表达产物经SDS-PAGE发现有一相对分子量约为63 kD的条带,其含量约占总蛋白量的13％,对目的蛋白进行纯化后发现,以400 mmol/L咪唑洗脱液洗脱时效果为理想,纯度可达90％以上.结论 pET32a-ipaC重组表达质粒转化大肠杆菌B121(λDE3),可稳定、高效地表达目的蛋白;QIAexpressionistTM蛋白纯化系统是一种简便、高效的纯化系统,可获得高纯度的目的蛋白.
关键词： 侵袭性大肠埃希菌 毒力蛋白(IpaC) 原核表达蛋白 纯化
