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TRESK通道与偏头痛
TRESK通道(TWIK-related Spinal Cord K+ Channel,TRESK)是近新发现与先兆偏头痛相关的双孔钾离子通道(K2P),其在基因、分子结构、生理药理学特性方面不同于K2P家族的其他双孔钾离子通道.研究发现TRESK通道突变可致神经元兴奋性增加,先兆偏头痛中TRESK通道异常致疼痛阚值降低的机制,提示TRESK通道可能成为偏头痛或疼痛治疗靶点之一.
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骨癌痛大鼠脊髓背角TRESK表达水平的变化
目的 探讨骨癌痛大鼠脊髓背角神经元双孔钾离子通道TRESK(TWIK-related spinal cord K+ channel,TRESK)表达水平的变化.方法 雌性SD大鼠(体重150～180 g),随机分为假手术组(Sham组)和骨癌痛组(BCP组).在术前1 d、术后3、5、9、14 d分别测量各组大鼠机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)的变化,于第14天取腰段脊髓免疫荧光染色及Western blot检测各组大鼠腰段脊髓背角神经元TRESK的表达变化.结果 手术前两组大鼠MWT值差异无统计学意义(P＞0.05);BCP组在手术后5 d MWT值开始降低,与Sham组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光染色显示TRESK的表达主要位于脊髓背角.Western blot检测结果 显示,BCP组的TRESK蛋白表达较Sham组明显减少(P＜0.05).结论 骨癌痛大鼠脊髓背角神经元TRESK表达降低,这种表达的改变可能与骨癌痛发生机制相关.
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TRESK介导mTOR信号通路对谷氨酸诱导脊髓神经元细胞凋亡的影响
目的 观察TRESK介导mTOR信号通路对谷氨酸诱导脊髓神经元细胞凋亡的影响.方法 脊髓原代神经元细胞接种于培养孔或培养皿中.采用随机数字表法,将其随机分为4组,每组48孔和18皿:空白对照组(C组)、谷氨酸处理组(G组)、谷氨酸+TRESK siRNA组(Glu+T组)和谷氨酸+TRESK siRNA+mTOR特异性抑制剂组(Glu+T+m组).C组不予任何处理;G组谷氨酸(100μmol/L)处理24 h;Glu+T组使用TRESK siRNA转染神经元细胞后,谷氨酸(100μmol/L)处理24 h;Glu+T+m组使用TRESK siRNA转染神经元细胞后,终浓度为20 nmol/L的mTOR特异性抑制剂Rapamycin(Rapa)预处理20 min后再用谷氨酸(100μmol/L)处理24 h.各组谷氨酸处理24 h后,测定神经元凋亡率、cleaved Caspase3和Bax蛋白的表达水平,测定mTOR磷酸化水平及TRESK mRNA表达.结果 与C组比较,G组大鼠脊髓神经元活力降低,细胞凋亡率升高,cleaved Caspase3和Bax蛋白表达上调(P<0.05);与G组比较,Glu+T组大鼠脊髓神经元活力降低,细胞凋亡率升高,cleaved Caspase3和Bax蛋白表达增加(P<0.05);与Glu+T组比较,Glu+T+m组大鼠脊髓神经元活力升高,细胞凋亡率下降,cleaved Caspase3和Bax蛋白表达减少(P<0.05).与C组比较,G组脊髓神经元TRESK mRNA表达明显上调(P<0.05);与G组比较,Glu+T组大鼠脊髓神经元TRESK mRNA表达明显下调(P<0.05).与C组比较,G组脊髓神经元mTOR磷酸化水平表达明显增加(P<0.05);与G组比较,Glu+T组脊髓神经元mTOR磷酸化水平表达明显增加(P<0.05);与Glu+T组比较,Glu+T+m组脊髓神经元mTOR磷酸化水平表达明显减少(P<0.05).结论 TRESK介导mTOR信号通路抑制谷氨酸诱导脊髓神经元凋亡.
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鞘内注射TRESK-shRNA慢病毒对大鼠痛阈及脊髓JNK磷酸化的影响
目的 评价鞘内注射TRESK-shRNA慢病毒对大鼠痛阈及脊髓JNK磷酸化的影响.方法 健康雄性SD大鼠,体质量200～ 250 g,进行鞘内置管术.取鞘内置管成功的大鼠36只,采用随机数字表法分为3组(n=12):空白对照组(C组)、TRESK-shRNA慢病毒组(TRESK组)和阴性慢病毒组(V组).TRESK组和V组分别鞘内注射TRESK-shRNA慢病毒和阴性慢病毒,10 μL慢病毒,病毒滴度为1×108 IFU/mL,1次/d,连续7 d;C组于相同时点鞘内注射10 μL生理盐水.各组大鼠分别于鞘内注射前1d(T0)及鞘内注射1 d(T1)、3 d(T2)、5d(T3)、7 d(T4)测定机械刺激缩足阈(MWT)和热刺激缩足潜伏期(TWL).鞘内注射7d疼痛行为学测定结束后处死大鼠,取L4-5段背根神经节(DRG)和脊髓组织,realtime PCR检测背根神经节TRESK mRNA表达,Westem blot 检测脊髓JNK磷酸化水平.结果 TRESK组T3、T4时的MWT明显低于C组(P＜0.05).与C组相比,TRESK组L4～5术侧DRG的TRESK mRNA表达明显降低(P＜0.05).与C组相比,TRESK组L4-5脊髓的JNK磷酸化水平明显增高(P＜0.05).结论 鞘内注射TRESK-shRNA慢病毒可降低大鼠的机械痛阈,可能与激活脊髓JNK磷酸化有关.
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鞘内注射TRESK过表达腺病毒抑制JNK活化和神经元凋亡减轻神经病理性疼痛
目的 观察鞘内注射TRESK过表达腺病毒对神经病理性疼痛大鼠背根神经节JNK磷酸化和神经元凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠72只,随机分为6组(n=12):空白对照组(C组)、假手术组(S组)、神经病理性疼痛组(NP组)、TRESK过表达腺病毒组(T组)、阴性腺病毒组(V组)和生理盐水组(NS组).NP组、T组、V组和NS组采用坐骨神经分支选择性损伤(SNI)大鼠模型.T组、V组和NS组于造模后分别在鞘内注射TRESK基因重组腺病毒、阴性腺病毒和等容量生理盐水.分别于造模前1d(基础状态,BL)和造模后1、3、7、14 d(D1、D3、D7、D14),测定机械刺激缩足阈(MWT)和热刺激缩足潜伏期(TWL);D7时每组处死6只大鼠,检测背根神经节TRESK蛋白表达;D14时每组处死剩余6只大鼠,观察DRG神经元凋亡情况、Caspase-3蛋白表达和JNK磷酸化水平.结果 与C组、S组、T组相比,NP组、V组和NS组L.5术侧DRG的TRESK蛋白表达明显降低(P＜0.05).与C组、S组相比,NP组、T组、V组和NS组D1、D3、D7、D14时的MWT明显降低(P＜0.05)、L.5DRG的JNK磷酸化水平明显增高(P＜0.05)、L5DRG的细胞凋亡率和Caspase-3表达明显增高(P＜0.05);与NP组、V组、NS组相比,TRESK组D1、D3、D7、D14时的MWT的明显升高(P＜0.05)、L5DRG的JNK磷酸化水平明显降低(P＜0.05)、细胞凋亡率和Caspase-3表达明显降低(P＜0.05).鞘内注射TRESK过表达腺病毒可明显减轻SNI大鼠的机械痛敏、明显上调SNI大鼠DRG的TRESK表达、明显降低SNI大鼠DRG的JNK磷酸化和神经元凋亡.结论 鞘内注射TRESK过表达腺病毒可通过抑制JNK活化和神经元凋亡减轻神经病理性疼痛.
关键词： TRESK 背根神经节 c-Jun氨基末端激酶 凋亡 神经病理性疼痛
