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刘寄奴抗炎组分筛选及其机制研究
目的 考察刘寄奴活性组分及其对干扰素-γ(IFN-γ)和脂多糖(LPS)协同诱导RAW 264.7细胞的抗炎机制.方法 应用溶剂萃取和D101大孔树脂分别制备刘寄奴各提取物和总黄酮.紫外分光光度法测定总黄酮的含量;IFN-γ和LPS协同诱导细胞炎症模型;Greiss reaction法测定各提取物及总黄酮对细胞上清液中亚硝酸盐含量的影响;RT-PCR法考察总黄酮对细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、诱导型环氧合酶(COX-2)mRNA的影响;Western blot法考察总黄酮对细胞iNOS、COX-2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达的影响.结果 刘寄奴乙酸乙酯部位与其他提取物相比,在相同剂量时对亚硝酸盐含量的抑制率高,由此富集获得的总黄酮含量达53%.刘寄奴总黄酮呈剂量依赖性抑制细胞上清液中亚硝酸盐的含量,并对刺激后的细胞活力有保护作用;刘寄奴总黄酮呈抑制iNOS、COX-2 mRNA表达,抑制iNOS、COX-2、p-ERK的蛋白表达.结论 活性导向的分离提示乙酸乙酯部位是刘寄奴抗炎活性组分之一,由此富集的总黄酮呈剂量依赖性抑制细胞上清液中亚硝酸盐含量,部分通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)中的细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路抑制iNOS和COX-2基因和蛋白的表达而达到抗炎效果.
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不同型号大孔树脂纯化的刘寄奴总黄酮对诱导型一氧化氮合酶的抑制作用
目的 考察不同型号大孔树脂纯化的刘寄奴总黄酮对IFN-γ和LPS协同诱导RAW264.7细胞中NO表达的影响. 方法 应用溶剂萃取和AB-8、D101、ADS-17大孔树脂分别制备刘寄奴总黄酮,分光光度法测定总黄酮的含量;IFN-γ和LPS协同诱导RAW264.7造成炎症模型;Griess reaction测定总黄酮对细胞上清液中亚硝酸盐含量的影响;RT-PCR考察总黄酮对细胞内诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的影响;Western blot考察总黄酮对细胞iNOS蛋白表达的影响. 结果 3种刘寄奴总黄酮含量均达到50%以上,且以ADS-17型大孔树脂富集所得的总黄酮含量高,达到67.78%.3种刘寄奴总黄酮均呈剂量和时间依赖性抑制细胞上清液中亚硝酸盐的含量,同等流程中以ADS-17型大孔树脂富集的总黄酮达到半抑制率的剂量为小.ADS-17型刘寄奴总黄酮呈剂量依赖性抑制iNOS mRNA和蛋白的表达. 结论 ADS-17型大孔树脂有效富集刘寄奴黄酮类化合物,适用于刘寄奴总黄酮的提取.ADS-17型刘寄奴总黄酮呈时间和剂量依赖性抑制细胞上清液中亚硝酸盐含量,部分通过抑制iNOS mRNA和蛋白的表达达到下调NO产量的结果.刘寄奴总黄酮可能是刘寄奴抗炎药效的物质基础,有望进一步开发成为iNOS抑制剂.
