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中性粒细胞弹性蛋白酶天然抑制剂及其筛选方法的研究进展
目的 人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)和内源性人中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂(HNEI)的失衡可引发许多以HNE为中介的疾病,因此HNE已作为众多研究的热点靶标,以寻求潜在有效的HNEI.在对内源性和化学合成HNEI进行简单介绍的同时,主要对可以抑制HNE的活性或释放的天然化合物进行综述,并总结了国内外研究者筛选天然HNEI的主要研究方法.
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HNE和Fenton合剂对晶状体上皮细胞骨骼的作用
目的研究HNE和Fenton合剂对人晶状体上皮细胞株(HLEC)和大鼠晶状体的细胞骨骼的早期改变,以了解这些改变在白内障发生中的作用.方法HLEC及大鼠晶状体经HNE、Fenton合剂处理,使用试剂盒测定细胞凋亡,观察和记录白内障的变化;加抗肌动蛋白、vimentin和微管蛋白抗体进行免疫组织化学及Western Blot分析.结果HNE诱导HLEC细胞凋亡发生在接触后1 h,2～4 h为明显;Fenton合剂迟至4 h发生,48 h达高峰.HNE和Fenton合剂均能引起大鼠晶状体混浊,并随时间延长而加剧.接触HNE和Fenton合剂后,HLEC细胞变圆和皱缩,细胞骨骼丢失明显;肌动蛋白、vimentin和微管蛋白随时间延长而减少;大鼠晶状体皮质和核的这三种细胞骨骼几乎均有明显下降甚至消失.结论HNE和Fenton合剂可致晶状体上皮细胞凋亡及白内障形成,该结果与细胞骨骼的损伤和丢失密切相关,脂质过氧化引起的细胞骨骼的损伤可能在白内障形成过程中起一定的作用.
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人眼晶状体醛脱氢酶1的克隆表达和酶特性研究
目的:研究人眼ALDH1A1的结构与功能学特点.方法:使用标准的PCR技术,从人晶状体cDNA文库扩增ALDH1A1.扩增的ALDH1A1(1.5kb)被插入到克隆表达载体pET-28b,再转染到菌株BL21DE3中.表达出来的蛋白质经His-tag柱纯化,使用 thrombin切除His-tag.对纯化的ALDH1A1的酶学特点,如酶活性与辅酶、缓冲液、还原剂、pH以及析出方式等的关系进行了检测.结果:从人晶状体的基因文库,成功扩增了ALDH1A1,重组的人晶状体ALDH1A1为1 506bp的DNA及501个氨基酸组成,分子量为54.8kDa,PI=6.8.与人的肝脏ALDH1A1 100%同源,与大鼠和小鼠肝脏的ALDH1A1有85%的同源性.Thrombin酶切较imidazole洗脱的ALDH1A1活性保持得更持久,纯化的ALDH1A1在碱性的sodium pyrophosphate反应缓冲液中,NAD为辅酶和dTT作为还原剂时的活性较高,其活性随pH增高而增加.结论:ALDH1A1与人肝组织的同工酶有相似的作用.
