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谷胱甘肽 S-转移酶pulldown文献资料
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结核分枝杆菌 Rv3425与 Rv3614c的相互作用
为探究结核分枝杆菌脯氨酸‐脯氨酸‐谷氨酸（PPE ）蛋白家族 Rv3425的生物学功能，利用免疫共沉淀联合质谱分析，在卡介苗（BCG）中筛选与Rv3425相互作用的蛋白。首先，以聚合酶链反应（PCR）扩增获得Rv3425基因，并克隆于pMV261载体。将重组载体转化入BCG ，裂解细胞，蛋白免疫印迹法证实目的蛋白可在BCG中表达。通过免疫共沉淀，用特异抗体分离出BCG中的Rv3425蛋白复合体，质谱鉴定其成分，在美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库中检索各蛋白的功能，筛选与 Rv3425相互作用的蛋白，并用谷胱甘肽 S‐转移酶（GST ） pulldown验证。结果显示，免疫共沉淀联合质谱分析筛选到10个与Rv3425相互作用的蛋白，在细胞内Rv3425协同作用下参与肽聚糖合成途径、分枝菌酸合成途径、ESX‐1蛋白分泌系统及细菌毒力调控。GST pulldown验证发现Rv3614c与Rv3425可体外结合。本研究证实 Rv3425与 Rv3614c存在相互作用，Rv3425可能与ESX‐1蛋白分泌系统及结核分枝杆菌致病机制密切相关。
