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布鲁菌omp19原核表达和间接酶联免疫吸附试验检测布鲁菌方法的建立
本研究原核表达并纯化了布鲁菌脂蛋白Omp19，并通过蛋白免疫印迹法对其免疫原性进行验证。采用Omp19作为包被抗原，建立检测羊种布鲁菌的间接酶联免疫吸附试验（iELISA），检测90份羊血清样本，并与标准血清凝集试验（SAT）比较，用SPSS软件进行数据分析。结果显示，iELISA与SAT的阳性符合率为95．12％，阴性符合率为67．35％，Kappa值为0．6077。对2种方法进行McNemar卡方检验，结果有显著性差异（P＜0．05）。本研究建立的iELISA与SAT的总符合率达80％，可作为羊种布鲁菌病血清学诊断的备用方法。
关键词： 布鲁菌 omp19 间接酶联免疫吸附试验 标准血清凝集试验 -
羊布鲁杆菌脂蛋白 OM P19单克隆抗体制备与鉴定
目的：制备与鉴定羊布鲁杆菌脂蛋白OM P19单克隆抗体，用于布菌感染免疫机制研究。方法将OM P19基因连接入pET‐30a（＋）表达载体中，构建pET‐30a（＋）／OMP19质粒，转化入大肠埃希氏菌BL21（E3），以不同浓度异丙基‐β‐D硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达，采用镍金属螯合亲和层析（NI‐NTA）纯化；以布菌阳性血清检测重组蛋白免疫反应性，并利用杂交瘤技术制备单克隆抗体，以天然OM P19蛋白及布菌外膜蛋白提取物（NM P）对制备的单克隆抗体进行Western Blot及酶免疫染色试验（IEST）鉴定。结果表达了OMP19蛋白，分子量约19 kDa ，通过纯化纯度可达95％，Western Blot分析显示蛋白具有良好的抗原性，并制备了OM P19抗原23株鼠源性单克隆抗体，鉴定结果显示22（95．65％）株能与天然OM P19蛋白反应，18（78．26％）株能与NM P反应，其中IgG1（k）亚型占91．30％；4株能与羊种布鲁氏菌菌涂片反应。结论成功制备具有良好抗原性的重组OM P19蛋白，筛选出识别天然蛋白的单克隆抗体，已初步应用于布菌的检测，为OM P19抗原B细胞表位的筛选奠定基础。
