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内蒙古白绒山羊Izumo mRNA在睾丸及附睾组织中的表达
目的 研究精子膜特异性蛋白Izumo基因mRNA在内蒙古白绒山羊睾丸和附睾组织中的表达.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法对内蒙古白绒山羊Izumo基因的部分片段进行重新克隆.然后重新设计一对引物,利用RNA印迹技术,以非放射性地高辛标记法对引物进行处理,制成地高辛标记DNA探针,与绒山羊睾丸和附睾头、体、尾部组织的总RNA进行杂交.结果 RT-PCR扩增产物片段大小与预期的788 bp相符.RNA印迹试验中,标记的探针浓度为100 pg/μl,检测结果显示Izumo mRNA在内蒙古白绒山羊睾丸和附睾头、体、尾部组织均有表达.结论 内蒙古白绒山羊睾丸和附睾组织均可表达Izumo mRNA,从而为进一步研究Izumo在人类精卵融合中的作用奠定了基础.
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内蒙古白绒山羊Izumo蛋白的基因编码区cDNA序列扩增及结构初步分析
目的 对内蒙古白绒山羊精子膜蛋白Izumo的基因编码区cDNA序列进行扩增并对其结构作初步分析.方法 以已知的内蒙古白绒山羊Izumo部分基因序列为模板,采用cDNA末端快速扩增技术扩增3′端和5′端未知序列,钓取基因编码区,并分析编码区氨基酸序列.结果 经序列扩增和拼接,得到1035 bp的Izumo编码区cDNA序列,后者编码由344个氨基酸组成的蛋白.氨基酸序列中包含免疫球蛋白样结构域.Izumo编码区的疏水性平均值为-0.181.找到4个位于Izumo蛋白胞外区的潜在磷酸化位点.结论 进一步确定Izumo属于免疫球蛋白超家族的一员,初步认为Izumo是一种亲水性蛋白,根据潜在磷酸化位点的位置,推断磷酸化可能不是Izumo蛋白发挥作用的机制.
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pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响
背景与目的:精卵融合是发生在受精过程中的重要生物学事件,Izumo是位于顶体内膜上的I型免疫球蛋白,是一种具有精子特异性的膜蛋白,在精卵融合中起关键作用.我们研究pCXN2-mIZUMO在小鼠C57BL/6肌肉中的表达及对其生育能力的影响,为进一步研究免疫避孕手段提供实验依据.材料与方法:用重组质粒pCXN2-mIZUMO分别免疫雌和雄性C57BL/6小鼠.ELISA测定小鼠体内的抗Izumo抗体水平,检测小鼠抗血清在体外受精中对受精率的影响,被免疫的雌性、雄鼠分别与正常的雄、雌鼠交配,雌雄合笼比例为2:1,分娩完成后统计其产仔数.结果:pCXN2-mIZUMO可以在小鼠体内诱发抗Izumo特异性免疫应答.被pCXN2-mIZUMO免疫后的小鼠抗血清在体外能够降低其受精率;各组产仔数分别为:实验雌鼠组2.9±0.66;对照雌鼠组5.4±0.82;实验雄鼠组5.1±0.99;对照雄鼠组6.0±1.34.实验雌鼠组的生育能力比对照雌鼠组明显降低(P＜0.05).结论:重组质粒pCXN2-mIZUMO免疫雌性小鼠具有降低生育能力的作用.
