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内蒙古白绒山羊Izumo mRNA在睾丸及附睾组织中的表达
目的 研究精子膜特异性蛋白Izumo基因mRNA在内蒙古白绒山羊睾丸和附睾组织中的表达.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法对内蒙古白绒山羊Izumo基因的部分片段进行重新克隆.然后重新设计一对引物,利用RNA印迹技术,以非放射性地高辛标记法对引物进行处理,制成地高辛标记DNA探针,与绒山羊睾丸和附睾头、体、尾部组织的总RNA进行杂交.结果 RT-PCR扩增产物片段大小与预期的788 bp相符.RNA印迹试验中,标记的探针浓度为100 pg/μl,检测结果显示Izumo mRNA在内蒙古白绒山羊睾丸和附睾头、体、尾部组织均有表达.结论 内蒙古白绒山羊睾丸和附睾组织均可表达Izumo mRNA,从而为进一步研究Izumo在人类精卵融合中的作用奠定了基础.
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内蒙古白绒山羊Izumo蛋白的基因编码区cDNA序列扩增及结构初步分析
目的 对内蒙古白绒山羊精子膜蛋白Izumo的基因编码区cDNA序列进行扩增并对其结构作初步分析.方法 以已知的内蒙古白绒山羊Izumo部分基因序列为模板,采用cDNA末端快速扩增技术扩增3′端和5′端未知序列,钓取基因编码区,并分析编码区氨基酸序列.结果 经序列扩增和拼接,得到1035 bp的Izumo编码区cDNA序列,后者编码由344个氨基酸组成的蛋白.氨基酸序列中包含免疫球蛋白样结构域.Izumo编码区的疏水性平均值为-0.181.找到4个位于Izumo蛋白胞外区的潜在磷酸化位点.结论 进一步确定Izumo属于免疫球蛋白超家族的一员,初步认为Izumo是一种亲水性蛋白,根据潜在磷酸化位点的位置,推断磷酸化可能不是Izumo蛋白发挥作用的机制.
