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Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏骨髓来源树突状细胞瘤苗的抗肿瘤免疫学效应
目的:研究Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的骨髓来源树突状细胞(BMDCs)的抗肿瘤免疫生物学效应.方法:用Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏BMDCs制成瘤苗,瘤苗的效应通过C57BL/6J小鼠肝细胞癌模型验证.皮下接种Hepal-6细胞8d后,成瘤小鼠随机分实验组,足垫部皮下注射Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏BMDCs;无血清RPMI-1640注射组、BMDCs注射组和单纯Hepal-6细胞裂解蛋白致敏BMDCs注射组.取肿瘤组织分离成细胞悬液,FACS检测CD11c+细胞、CCR7+细胞、CD80+细胞和CD86+细胞;取淋巴结、脾、肿瘤冷冻切片并采用免疫组织化学检测淋巴结、脾、肿瘤内Foxp3+细胞浸润的改变;ELISA检测瘤内转化生长因子-p1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)的表达.结果:实验组肿瘤组织比各对照组有更多的CD11c+细胞、CCR7+细胞、CD80+细胞和CD86+细胞浸润;与各组对照相比较,实验组Foxp3+细胞在淋巴结、脾、肿瘤内浸润明显减少;实验组细胞因子TGF-β1、IL-10低于各对照组,IFN-γ、IL-2则高于各对照组.结论:Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的BMDCs瘤苗能促进DCs在瘤内浸润和成熟,减少Foxp3+细胞在肿瘤内的浸润,下调免疫抑制细胞因子TGF-β1、IL-10和上调免疫促进因子IFN-γ、IL-2分泌,有较强的抗肿瘤免疫生物学效应.
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原发性胆汁性肝硬化患者外周血CD4+CD25+T细胞的定量及其功能分析
目的 检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血CD4+CD25+免疫调节性T细胞(Tregs)数量及其对T效应细胞(Treps)增殖的抑制作用.方法 流式细胞仪定量检测PBC患者及对照组外周血中Tregs细胞百分比.统计无症状期、症状期、肝硬化期3组患者Tregs细胞百分比.免疫磁珠分离Tregs,检测CD62L、T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)的表达.体外细胞培养,3H-胸腺嘧啶掺入法测定Tregs对Treps的免疫抑制功能.结果 PBC患者外周血CD4+T细胞中的Tregs[3.63 s0.92)%]明显低于健康对照组[(7.42±1.09)%,P<0.01)].无症状期、症状期、肝硬化期各组Tregs细胞分别为(3.93±0.71)%、(3.64±0.83)%、(3.52±0.95)%,均明显低于健康对照组,但3组之间差异无统计学意义.Tregs细胞高表达CD62L、CTLA-4、GITR分子.PBC患者Treps的体外增殖可以被自身Tregs所抑制,1:1、1:2、1:4、0:1的比例平均抑制率分别为(78.2±4.9)%、(51.6±7.1)%、(21.7±5.6)%、0,健康对照分别为(75.1±5.3)%、(54.5±6.4)%、(27.6±6.3)%、0,两组相比差异无统计学意义.结论 PBC患者Tregs数量的降低可能是PBC的致病机制之一.
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Graves病患者外周血CD4+、CD25+调节性T细胞的定量及功能分析
目的:检测Graves病患者外周血CD4+、CD25+免疫调节性T细胞(T regulatory cells,Tregs)数量并对其进行免疫抑制功能分析.探讨Tregs细胞在其发病机制中的作用.方法:利用不同荧光标记的鼠抗人CD3、CD4、CD25单克隆抗体标记患者及对照组外周血淋巴细胞,流式细胞仪定量检测Tregs细胞占CD4+T细胞的百分比.用CD4细胞阴性选择磁珠分离CD4细胞,用抗CD25的磁珠分选CD25+ Tregs和CD25-Tregs的效应性T细胞(T responder cells,Treps),用体外细胞培养和3H-thymidine掺入法测定Tregs细胞对Treps细胞的免疫抑制功能.结果:36例Graves病患者与20例健康对照组外周血CD4+T细胞中Tregs细胞分别为(6.96±1.98)%及(8.22±2.78)%,两者差异无统计学意义(P>0.01). Graves病患者的Tregs细胞可以抑制自身Treps细胞的体外增殖,1:1、1:2、1:4、0:1比例平均抑制率分别为(48.2±4.9)%、(29.6±7.1)%、(17.7±5.6)%、0,健康对照组的平均抑制率分别为(73.1±5.3)%、(51.5±5.8)%、(29.6±6.3)%、0.Graves病组与健康对照组相比平均抑制率降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论:Graves病患者外周血中Tregs细胞的数量与对照组没有差异,但其免疫抑制功能明显降低,提示Tings细胞功能的降低与Graves病的致病机制存在关联.
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肠易激综合征大鼠模型外周血免疫调节性T细胞的研究
目的:观察外周血免疫调节性T细胞(Treg)在感染后肠易激综合征(PI-IBS)大鼠模型中的变化,探讨Treg在其发病机制中的作用.方法:随机将16只大鼠分为模型组和正常对照组,分别用福氏Ⅳ型志贺氏痢疾杆菌和生理盐水灌胃.模型组急性肠道感染16～22 d,测定两组大鼠的肠道感觉阈值和平滑肌张力积分,远端结肠行病理学检查,用流式细胞仪分析外周血Treg的比例.结果:模型组肠道感觉阈值明显降低(P＜0.05),肠道平滑肌张力积分明显升高(P＜0.05),而组织学无明显变化,表明PI-IBS大鼠模型建立成功;模型组外周血Treg/CD4+T比值明显下降(P＜0.05).结论:大鼠在急性肠道感染消失后,会出现PI-IBS;免疫调节的异常参与了PI-IBS的发病过程.
