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睾酮在自由基损伤的海马神经元保护作用中的机制
目的:用荧光染色和免疫印迹方法观察睾酮发挥神经保护作用中是否有抗神经元凋亡机制的参与.方法:大鼠原代培养10d海马神经元,按实验分为对照组、H2O2处理组、预先加入睾酮后再暴露于H2O2组.Hoechst 33258显色,荧光显微镜下观察拍照.原代培养海马神经元Bcl-2和Bax蛋白进行免疫分析.结果:原代培养海马神经元,Hoechst 33258显色后神经元呈均匀蓝色光,胞核明显.在H2O2组(100μm)可见凋亡的细胞,胞核呈深染半月形或碎块状荧光,突起不明显.预先加入睾酮组再暴露于H2O2,海马神经元可见细胞核染色明显,胞核清楚,无明显核碎片.免疫印迹法显示对照组海马神经元有极少量Bcl-2与Bax表达.加入H2O2后细胞Bax表达增加,而Bcl-2表达下降,与对照组相比,差异有统计学意义.提前加入睾酮后暴露于100μmH2O2,可见Bcl-2表达增加,Bax表达下降,与H2O2组比较,差异有统计学意义.结论:自由基对原代培养海马神经元的损伤机制中,有细胞凋亡机制参与,预先给予睾酮后抗凋亡蛋白增加,而凋亡相关蛋白表达减少.
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温度和Hoechst 33258浓度对人活精子标记效果的影响
目的 研究孵育温度和荧光染料Hoechst 33258( H258)的浓度对活体标记人类精子效果的影响.方法 随机选取14份精液标本,经洗涤处理后,在不同温度(0℃、室温和37℃)下分别用0(对照)、0.01、0.1 mg/mL的H258孵育1h.记录精子前向运动百分率及H258着色率.以未予处理的精液标本作为空白对照组.结果 在观察条件范围内,孵育温度与H258浓度对精子运动的影响有统计学意义.随着H258质量浓度的升高和孵育温度的降低,精子前向运动百分率下降(P＜0.01).精子着色率随孵育温度和H258质量浓度的升高而提高；当H258质量浓度为0.1 mg/mL时,不同孵育温度下的精子着色率比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 H258可用作精子活体荧光标记,37℃+0.1 mg/mL H258是本研究中优的染色条件.但仍需要根据不同使用目的选择孵育条件.
关键词： 精子 温度 Hoechst 33258 活体标记
