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神经营养素-4在成年猴脑的分布
目的:为探讨神经营养素-4(Neurotrophin-4,NT-4)在成年灵长类动物猴脑的分布及功能提供有用的形态学依据.方法:免疫组织化学SP法.结果:NT-4-IR(Neurotrophin-4 immuno reactive)分布于大脑皮层Ⅲ-Ⅴ层的部分神经元胞体及突起以及白质内少量的神经胶质细胞;小脑皮质及白质内的部分神经元;海马CA1、CA2、CA3区的部分神经元;此外豆状核、尾状核、脑桥核、前庭神经核、薄、契束核、副神经核等可见散在阳性反应细胞及交织成网的纤维.结论:NT-4-IR广泛地分布于猴脑的多种组织和细胞,提示其功能可能涉及不同类型的神经元及可能的非神经元.
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移植神经营养素-4基因工程细胞对脊髓前角神经元的保护作用
用重组逆转录病毒介导的体外神经营养素-4(NT-4)基因转移方法, 制备高表达NT-4基因工程细胞并移植大鼠坐骨神经离断处.尼氏染色和ChE染色的结果表明, 移植NT-4基因工程细胞对外周神经损伤所造成的运动神经元的退变有显著的改善作用, 而且这种作用可以维持三个月.
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人神经营养素-4的克隆及其在原核细胞的表达
目的:体外扩增人神经营养素-4(NT-4)基因,经克隆后在原核细胞中表达并鉴定人重组NT-4,为研究其生物学特性及临床应用奠定基础.方法:以人类基因组DNA为模板,扩增NT-4成熟活性蛋白的DNA编码序列,将此DNA片段克隆到载体PBV220中,对重组质粒进行PCR筛选和限制性酶切分析,确定后将该重组质粒转化到大肠杆菌DH5α进行诱导表达.用抗NT-4抗体进行Western blot鉴定重组蛋白.结果:体外成功扩增NT-4基因,转染的大肠杆菌经诱导后表达出能被抗NT-4抗体识别的重组蛋白,其表达量为15%.结论:在原核细胞能成功表达NT-4.
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面神经损伤大鼠面神经核团中NT-4 mRNA蛋白质表达变化及意义
目的 分析面神经损伤大鼠面神经核团中神经营养素-4(NT-4)mRNA及蛋白质表达变化及意义.方法 选取50只Wistar大鼠,所有大鼠右侧制造面神经骨管内挤压伤模型,左侧作为自身对照.分别于处理后第1天、第7天、第14天、第21天、第28天采用原位杂交及免疫组化检测大鼠面神经核团中NT-4 mRNA表达细胞数情况,并采用计算机图像分析测定其灰度,NT-4蛋白表达样本进行γ计数.结果 正常大鼠面神经核团有较少NT-4表达.面神经损伤大鼠面神经核团中的NT-4 mRNA含量及NT-4蛋白表达均明显升高,高于正常大鼠.面神经损伤大鼠面神经核团中的NT-4 mRNA含量及NT-4蛋白表达均于受损初期迅速增高,至损伤后14 d达高值,随后逐渐降低.结论 面神经损伤可刺激大鼠面神经核团NT-4 mRNA含量及NT-4蛋白的表达,其变化趋势为先迅速上升后逐渐下降,提示NT-4 mRNA含量及NT-4蛋白表达对面神经损伤的恢复具有重要意义.
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IL-31和他克莫司对Hacat细胞NT4表达的影响
目的:探讨白介素-31 (interleukin-31,IL-31)、他克莫司对角质形成细胞神经营养素-4 (neurotrophin-4,NT4)表达的影响.方法:培养人角质形成细胞株(Hacat细胞),采用不同浓度他克莫司作用24h,噻唑蓝比色法(MTT法)检测细胞增殖活性.IL-31、他克莫司单独或共同作用于Hacat细胞24h后,采用real-time PCR法检测NT4 mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测12、24 h各组细胞上清液中NT4含量.结果:低浓度他克莫司(10、100)ng/ml对细胞活性无明显影响(P＞0.05),高浓度(1 000 ng/ml)时细胞活性受到抑制(P=0.002).IL-31作用Hacat细胞后,其NT4mRNA表达和上清中NT4含量均增加(P＜0.05);100 ng/ml他克莫司作用24 h后他克莫司组和联合作用组细胞NT4 mRNA表达量和细胞上清中NT4含量均分别低于对照组和IL-31组(P＜0.05).结论:IL-31可促进角质形成细胞NT4表达,他克莫司可能通过降低角质形成细胞NT4表达水平而发挥其抗瘙痒作用.
