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HSV-1 VP22和hIL-18增强HBV DNA微球疫苗诱导的小鼠体液免疫应答
为了研究HSV-1 VP22和hIL-18作为分子佐剂对HBV DNA微球疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响,HSV病毒经Vero细胞培养增殖后,提取病毒DNA,PCR扩增VP22编码基因.从人PBMC中提取总RNA,RT-PCR扩增hIL-18.VP22、hIL-18按不同需要插入pcDNA3.1-S,构建成3种质粒:pcDNA3.1-VP22-S、pcDNA3.1-S-IL-18、pcDNA3.1-VP22-S-IL-18.制备DNA壳聚糖微球疫苗,鼻腔免疫小鼠,同时裸质粒DNA肌注小鼠,ELISA检测小鼠血清IgG、粪便sIgA水平.结果,与pcDNA3.1-S相比,pcDNA3.1-VP22-S、pcDNA3.1-S-IL-18、pcDNA3.1-VP22-S-IL-18均能引起小鼠血清IgG、粪便sIgA水平升高.在鼻腔免疫实验中,pcDNA3.1-VP22-S、pcDNA3.1-S-IL-18、pcDNA3.1-VP22-S-IL-18免疫组的血清IgG水平均在第8周达到高,并且与pcDNA3.1-S相比,抗体水平有差异(P＜0.05).研究结果表明,VP22和hIL-18能够增强乙肝DNA疫苗的体液免疫应答;制备的DNA微球疫苗经鼻腔免疫后,能够诱导黏膜免疫应答.
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pcDNA3.1/hIL-18真核表达载体的构建及表达
目的: 构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/IL-18, 并在哺乳动物细胞COS-7和Rlc310中进行瞬时和稳定性表达.方法: 从含hIL-18基因的中介载体pGEM-T Easy(pGEM-T/hIL-18)中, 以限制性内切酶酶切方法获得目的片段, 克隆入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中.以脂质体法转染COS-7和Rlc310细胞, 用RT-PCR检测IL-18 mRNA的水平, 免疫组化染色法检测蛋白表达.结果: 构建了hIL-18基因的重组真核表达质粒pcDNA3.1/IL-18, 并可在哺乳动物细胞中瞬时、稳定表达, 获得了可稳定表达hIL-18基因的Rlc310细胞株.结论: pcDNA3.1/IL-18的构建及表达, 为IL-18抗肿瘤作用的研究奠定了基础.
