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周期性机械拉伸对类风湿关节炎和骨关节炎成纤维样滑膜细胞BMP-2表达的影响
目的:研究周期性拉伸对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和骨关节炎(osteoarthritis,OA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-1ike synoviocytes,FLS)中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响,探讨力学刺激在不同病理过程中对滑膜组织的作用.方法:在正常条件和炎症条件下使用Flex cell 4000周期性力学加载系统,分别对正常、BA、OA来源的人膝关节FLS施加连续2h和6h的6%、0.5Hz的拉应力,比较测定BMP-2 mRNA表达的差异性.结果:2h的机械拉伸对3种FLS中BMP-2 mRNA的水平均无显著性影响,6h的机械拉伸能够显著升高RA FLS中BMP-2 mRNA的水平.炎症因子(IL-1β)作用2h对正常FLS无显著影响,作用6h使其中BMP-2 mRNA的水平显著升高;IL-1β作用2h和6h均使RA FLS中BMP-2 mRNA的水平显著升高,但只有作用2h才使OA FLS中BMP-2 mRNA的水平显著升高,作用6h对OA FLS中BMP-2 mRNA的水平无显著影响;炎症因子和力学刺激共同作用2h使正常和RA FLS中BMP-2 mRNA的水平显著升高,作用6h使正常、RA、OAFLS中BMP-2 mRNA水平均显著升高.结论:正常、HA、OA FL5中BMP-2 mRNA对于力学刺激和炎症因子的响应不同,结果提示在RA和OA发病机制中,炎症因子的影响可能比力学刺激更强;力学刺激和IL1β共同作用6h后对OA FLS中BMP-2 mRNA产生协同效应,提示两者联合作用对OA病情发展具有一定作用.
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PRF复合组织工程骨修复牙周骨缺损中基因的表达及意义
目的 探讨组织工程煅烧骨复合富血小板纤维蛋白(PRF)修复牙周骨缺损中BMP-2、骨保护素(OPG)和核因子B受体活化因子配体(RANKL)的表达及意义.方法 将36只新西兰大白兔随机均分为4组,制备单侧牙周骨缺损模型,其中3组于骨缺损处分别植入煅烧骨、Bio-oss骨和煅烧骨/PRF复合物,以未植入任何材料者作为空白对照.术后4,8,12周处死动物,获取完整标本,进行大体、Masson染色及免疫组化观察.结果 Masson染色:煅烧骨/PRF组术后8周时即见部分鲜红色成熟骨形成,骨成熟速度明显优于其他3组.免疫组化观察:术后4周时煅烧骨/PRF组BMP-2、OPG、RANKL强阳性表达,数目高于其他3组,差异具有统计学意义(P<0.05).RANKL阳性细胞的表达在骨改建过程中有不同程度的降低,煅烧骨/PRF组中组中RANKL下降为明显,差异有统计学意义(P<0.05).结论 煅烧骨/PRF组修复牙周骨缺损会增加BMP-2、OPG、RANKL的表达,通过促进成骨细胞分化成熟而刺激OPG表达升高,抑制破骨细胞,有助于加快牙周骨改建,缩短骨愈合过程.
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研究两种干细胞体外矿化过程中LIM矿化蛋白1的表达
目的： LIM矿化蛋白1（ LIM mineralization protein?1， LMP?1）是一种胞内非分泌型蛋白，广泛存在于各种组织中，它不仅影响骨基质的矿化而且还是成骨细胞分化和骨形成过程中重要的调节因子。本实验通过检测LMP?1在牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化过程中的表达情况，来研究胞内信号转导分子LIM矿化蛋白1对牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化的作用，为LMP?1作为成骨调节因子，影响骨基质矿化方面的研究提供参考。方法酶消化法体外培养牙髓干细胞，用挑克隆细胞团的方法对牙髓干细胞进行纯化传代培养。密度梯度离心法体外培养骨髓间充质干细胞。两种细胞分别设置实验组和对照组。实验组培养液中加入矿化诱导液，对照组不加矿化诱导液。分别于培养3、5、7、14天检测碱性磷酸酶的活性。培养21天茜素红染色检测矿化结节形成。培养期间，采用荧光定量PCR方法检测LIM矿化蛋白1、骨形态发生蛋白BMP?2、牙本质涎磷蛋白DSPP和Ⅰ型胶原蛋白COL?1、核心结合因子RUNX?2等成骨标志基因的表达，用SPSS 17．0对结果进行统计学分析。结果培养3、5、7、14天碱性磷酸酶的活性逐渐提高，且实验组碱性磷酸酶的活性显著高于对照组。培养21天实验组可见矿化结节形成。荧光定量PCR检测到实验组及对照组各个基因均表达，且实验组表达显著高于对照组。结论发现LIM 矿化蛋白1与牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞体外矿化过程相关，推测LIM 矿化蛋白1可能作为检测牙髓干细胞和骨髓间充质干细胞矿化的一个指标。
