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肺炎克雷伯菌中质粒AmpC酶和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药性
目的 了解浙江省金华市中心医院临床分离肺炎克雷伯菌中质粒AmpC酶和CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的发生率及其耐药性.方法 采用纸片扩散法(K-B)检测肺炎克雷伯菌对18种常用抗菌药物的敏感性.按美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的ESBLs表型确证试验检测;聚合酶链反应(PCR)检测菌株中的质粒AmpC酶基因和CTX-M型ESBLs基因.并对阳性扩增产物进行测序明确其基因亚型;接合试验了解质粒AmpC酶基因和ESBLs基因的可转移性;肠杆菌科细菌基因间重复一致序列(ERIC-PCR)分析菌株的同源性.结果 101株肺炎克雷伯菌中35.6%(36/101)的菌株ESBLs表型确证试验阳性,其中77.8%(28/36)的菌株含CTX-M型ESBL基因,以CTX-M-15和CTX-M-14基因型为主.11.9%(12/101)的菌株产质粒AmpC酶基因,DNA测序证实为DHA-1型质粒AmpC酶.5.9%(6/101)的菌株同时产质粒AmpC酶和ESBLs.结论 我院存在同时产质粒AmpC酶和ESBLs肺炎克雷伯菌的流行,质粒AmpC基因型别主要为DHA-1型,ESBLs基因型别主要为CTX-M-14或CTX-M-15型.耐药基因可通过接合的方式从供体菌转移至敏感细菌,临床上应加强对此类菌株的监测.
关键词： 肺炎克雷伯菌 质粒AmpC酶 CTX-M型超广谱β-内酰胺酶 耐药性 -
产CTX型超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌基因分析及耐药特征
目的 探讨产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌blaCTX-M基因分型及相应耐药特征.方法 采用双纸片法检测ESBLs,PCR检测blaCTX-M及blaCTX-M-1、-2、-8、-9、25组基因,肉汤稀释法检测抗菌药物MIC值.结果 83株大肠埃希菌中,45株ESBLs表型确证实验阳性,PCR扩增结果显示44株blaCTX-M扩增阳性,其中12株单独检测出blaCTX-M-1组,29株单独检测出blaCTX-M-9组,3株同时具有blaCTX-M-1组和blaCTX-M-9组,未检测出blaCTX-M-2、-8、-25组.所有菌株对亚胺培南皆敏感,对头孢唑林、头孢噻肟、头孢曲松皆耐药.CTX-M-1组菌株对头孢他啶、头孢吡肟的耐药率皆为91.6％(11/12),氨曲南耐药率为100％,左旋氧氟沙星、庆大霉素耐药率分别为100％和83.3％ (10/12).CTX-M-9组菌株对头孢他啶、头孢吡肟耐药率分别为44.8％(13/29)、41.4％ (12/29),氨曲南耐药率为55.2％(16/29),左旋氧氟沙星耐药率为89.7％(26/29)、庆大霉素耐药率为58.6％(17/29).CTX-M-1、-9两组菌株对头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南耐药率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 产ESBLs大肠埃希菌基因型以blaCTX-M为主,blaCTX-M-9组在blaCTX-M基因中占优势.CTX-M-9组菌株对头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南敏感性高于CTX-M-1组.
关键词： 大肠埃希菌 CTX-M型超广谱β-内酰胺酶 基因型 耐药特征 -
超广谱β-内酰胺酶表型检测与CTX-M型酶基因型检测的相关性分析
目的 了解采用双纸片协同法进行CTX-M酶的表型检测与多重PCR法检测基因型的相关性.方法 按CLSI/NCCLS所推荐的方法进行ESBLs表型确证试验,多重PCR法对ESBLs表型阳性株进一步进行CTX-M酶基因型的检测.结果 233株多重耐药革兰阴性杆菌中136株ESBLs表型阳性,经多重PCR扩增证实99株携带CTX-M型ESBL,CTX-M型ESBL检出率占ESBLs72.8%(99/136).根据多重PCR检测结果再回顾性地观察表型检测结果,发现以头孢他啶和头孢他啶/棒酸这对纸片进行试验,产CTX-M型ESBLs细菌检出数为0;以头孢噻肟纸片及头孢噻肟/棒酸这对纸片进行试验,产CTX-M型ESBLs细菌检出率72.8%(99/136),其中用上述两对纸片共同检出产CTX-M型ESBLs细菌检出率41.7%(58/136).结论 以头孢噻肟,头孢噻肟/克拉维酸这对纸片可达到有效进行CTX-M酶的表型检测的目的;用头孢噻肟,头孢噻肟/克拉维酸、头孢他啶,头孢他啶/克拉维酸这两对纸片同时进行筛检超广谱β-内酰胺酶,可有效降低ESBLs漏检率.
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新的基因型CTX-M-82的发现
目的 了解湖南地区中南大学三所附属医院产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的检出率,并确定其基因型.方法 收集2004年10月-2005年7月临床标本分离的ESBLs表型阳性大肠埃希菌52株,PCR法进一步进行CTX-M酶基因型的检测,PCR产物测序并通过blast分析确定其基因分型.结果 经多重PCR扩增,48株携带CTX-M基因,检出率为92.3％.共检出四种基因型,即CTX-M-3、CTX-M-14、CTX-M-15和CTX-M-82.结论 大肠埃希菌中CTX-M型超广谱酶相当普遍,主要为CTX-M-14、CTX-M-3、CTX-M-15;其中CTX-M-82为新的基因型,经美国Lahey临床医学中心专家确认并命名,GenBank登录号为DQ256091.
