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检测白血病细胞凋亡的二苯胺法
现有细胞凋亡的定量方法操作复杂且需贵重试剂或仪器。定性方法又难以精细研究细胞凋亡这一现象。我们参照Mangan等[1]的方法,建立一种以二苯胺(DPA)法测定DNA片段率来分析细胞凋亡的简单方法,并以此方法分析白血病细胞株HL-60受抗癌药物鬼臼乙叉甙(Etoposide)诱导时的凋亡情况。材料和方法 一、细胞 HL-60细胞株(本院血液病研究室提供),常规RPMI 1640培养基(Gbico产品)培养,隔天换液,实验选用对数生长期的细胞,将细胞浓度调整至106/ml,加入以二甲基亚砜(DMSO)溶解的鬼臼乙叉甙(Sigma产品),终浓度分别为0、5、10、20、40 μg/ml,作用3.5 h,用PBS(pH 7.2,不含Ca2+、Mg2+,下同)洗涤收获细胞。
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DPA法检测细胞凋亡及其在白血病中的应用
目的建立一种检测白血病细胞凋亡的新方法。方法高速离心将DNA样品区分为小分子量DNA片段及高分子量DNA(分别来自凋亡和未凋亡细胞)两部分,二苯胺(DPA)法测定各部分DNA含量,计算DNA片段率,从而分析细胞凋亡情况。以此方法分析了白血病细胞株HL-60受不同剂量抗癌药物VP-16诱导时的凋亡情况。结果与FCM法相比,各剂量组细胞凋亡率无显著差别(P>0.05),经密度梯度离心法分离提取的凋亡细胞,两种方法测得细胞凋亡率亦无明显差别(P>0.05)。结论二苯胺法测定DNA片段是分析白血病细胞凋亡的一种简单有效方法。