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细粒棘球蚴14-3-3蛋白序列、结构及抗原表位的分析
目的 应用生物信息软件分析细粒棘球蚴14-3-3 (Eg14-3-3)蛋白氨基酸序列、二级结构、三级结构并预测B细胞表位和T细胞表位,为后续确定和筛选优势抗原表位、研制安全高效的多肽疫苗及特异性诊断抗原奠定基础. 方法 采用DNAstar软件、ProPred MHC Class-Ⅱ Binding Peptide Prediction Server和Biosun等软件对Eg14-3-3的序列、结构及B细胞表位和T细胞表位进行预测. 结果 Eg14-3-3为相对分子质量27 940、含有247个氨基酸的酸性蛋白质,其二级结构主要由有6个α-helix结构中间连接短β-折叠及不规则卷曲结构,序列具有高度多变性,预测该蛋白存在14个B细胞表位区域和6个T细胞表位. 结论 分析了蛋白氨基酸序列、二级结构、三级结构,并预测出Eg14-3-3存在14个B细胞表位和6个T细胞表位.
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日本血吸虫14-3-3抗原编码基因的扩增和克隆
目的克隆日本血吸虫14-3-3抗原的编码基因,以研究其用于血吸虫病免疫诊断和免疫预防效果.方法以日本血吸虫成虫RAN为模板逆转录合成cDNA链,设计合成引物,用PCR法扩增14-3-3抗原基因编码序列,将其克隆入pGEM-T载体,并用双酶切和以质粒为模板的PCR进行鉴定.结果RT-PCR扩增出一条约780bp大小的特异性条带,重组质粒的双酶切和以质粒为模板的PCR均获得了一条与RT-PCR扩增出大小相同带.结论日本血吸虫14-3-3抗原重组pGEM-T克隆载体的成功构建,为进一步的研究提供了条件.
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日本血吸虫14-3-3抗原编码基因的克隆及序列测定
为了寻找日本血吸虫病新的诊断和候选疫苗分子,设计合成引物,以日本血吸虫成虫c DNA第一链为模板,用PCR法扩增出日本血吸虫14-3-3抗原(Sj14-3-3)基因编码序列,其大小约784bp,将其克隆入pGEM-T载体,重组质粒pGEM-T-Sj14-3-3经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段,序列测定结果表明具有一个长度为765 bp的完整开放阅读框,与曼氏血吸虫14-3-3核苷酸序列有高度同源性.本实验克隆了日本血吸虫14-3-3抗原的编码基因,并进行了序列测定,为进一步研究提供了条件.
