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清脂护肝方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用研究
目的：探讨清脂护肝方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用及其机制。方法58只雄性SD大鼠，均喂养高脂饲料，予以12只作对应。将造模成功的大鼠再随机分为模型组、低剂量、中剂量和高剂量清脂护肝方组，分别给予0．9％NaCl 溶液灌胃，清脂护肝方组予清脂护肝方药液灌胃6周；观察记录大鼠的行为表现及体质量变化。干预结束后次日处死所有大鼠并留取血清和肝脏，检测清脂护肝方对 NASH 大鼠肝生化指标的影响。免疫组织化学方法检测NASH 大鼠肝组织中 SSeCKS、Hck、Lyn、Fgr 的表达水平。体外实验：对库普弗细胞株采用不同浓度不同时间的 CCL4刺激，用优选方案的清脂护肝方药物血清培养后检测 SSeCKS、Hck、Lyn、Fgr 的表达。结果与正常对照组相比，模型组大鼠体重明显增加（P ＜0．05）；模型组 ALT、AST、TBIl 均较正常对照组升高（P ＜0．05）；模型组 TG、CH、LDL 均明显上升（P ＜0．01），HDL 亦有所降低（P ＜0．05）。与模型组相比，中大剂量清脂护肝方组体重均有减轻，其中大剂量组的体重减轻为明显（P ＜0．01）；清脂护肝方各剂量治疗组 ALT 与模型组比较明显降低（P ＜0．01），大剂量治疗组AST 与模型组比较明显降低（P ＜0．01）；清脂护肝方中、大剂量组的血清 TBIL 较模型组显著下降（P ＜0．01）；与模型组比较，清脂护肝方组的 TG、LDL 有所降低（P ＜0．05），尤其大剂量组降低相对更明显；清脂护肝方各剂量组 CH 有所降低，但仅有大剂量组有统计学差异（P ＜0．05）。ICC 结果表明：Lyn、Hck 在 kupffer 细胞中有表达，并与炎症程度呈正相关，清脂护肝方药物血清培养后表达减少，Fgr 和 SSeCKS 在 kupffer 细胞中无明显表达。ICC 结果表明：Hck、Lyn 在正常肝脏组织中低表达，模型组中高表达，用药组无论是大、中、小剂量组，在抑制 Hck、Lyn 两种 Src 相关激酶成员的阳性表达是有显著效果，特别是大剂量组，与模型组比较有显著意义（P ＜0．01）；模型组 SSeCKS 蛋白的表达显著低于正常组，在治疗组中的表达介于模型组和正常组，同时伴随 Lyn、Hck 表达的升高呈减少趋势，提示 SSeCKS 与 Src 家族相关激酶（Lyn、Hck ）存在某种上下游抑制关系；而清脂护肝方对 Fgr 的表达无明显影响，用药前后无统计学意义（P ＞0．05）。结论清脂护肝方能减轻肝脏的炎性反应，明显改善肝功能和血脂指标，其机制可能与 SSeCKS、Lyn、Hck 信号通路有关，且高剂量时疗效更优。
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清脂护肝方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用研究
目的：观察清脂护肝方对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)大鼠肝功能、血清炎症因子以及肝组织中 Src 家族相关激酶(Hck、Lyn)和 Src 抑制的蛋白激酶 C 底物(Src-suppressed C kinase substrate， SSeCKS)表达的影响并探讨其机制。方法：以高脂饲料制备NASH大鼠模型，将造模成功的大鼠再随机分为模型组、清脂护肝方组(低、中、高3个剂量组)，每组10只。模型组和正常组以0.9%NaCl溶液灌胃，清脂护肝方组予清脂护肝方药液灌胃6周。实验结束后检测大鼠肝功能、肝组织中 Hck、Lyn 和 SSeCKS 蛋白表达水平以及血清中白细胞介素-1( interleukin-1, IL-1)、白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平。结果：清脂护肝方能改善NASH大鼠的肝功能；清脂护肝方可下调Hck和Lyn的表达而上调SSeCKS表达,可降低血清IL-1、IL-6水平，但不影响TNF-α水平。结论：清脂护肝方能够改善NASH大鼠肝功能、降低炎症因子水平，其机制可能是通过调控Hck、Lyn、SSeCKS的表达从而减轻肝脏的炎症反应。
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Hck、Lyn和SSeCKS在Kupffer细胞中的表达及意义
目的：探讨Src家族相关激酶（Hck、Lyn）和Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C kinase substrate， SSeCKS）在Kupffer细胞中的表达及意义。方法：应用 Real-time PCR的方法检测正常Kupffer细胞和炎症Kupffer细胞中Hck、Lyn和SSeCKS的表达水平；用Western Blot的方法检测Hck、Lyn和SSeCKS在Kupffer细胞中的表达水平。构建非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis, NASH）大鼠模型，采用免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）方法检测Hck、Lyn和SSeCKS在大鼠肝脏组织Kupffer细胞中的表达水平。结果：RT-PCR显示Hck、Lyn和SSeCKS在小鼠Kupffer细胞中均有表达，用60%CCl4损伤液刺激后Hck、Lyn表达明显升高(P<0.01)，SSeCKS表达减少，但差异无统计学意义(P＞0.05)；Western Blot结果显示在Kupffer细胞中Hck、SSeCKS表达较为明显，Lyn未见明显表达；IHC结果显示Hck、Lyn和SSeCKS在大鼠正常肝组织Kupffer中均有表达；在炎症组织中Hck、Lyn的表达明显增加，而SSeCKS的表达却显著减少。在炎症刺激后Hck、Lyn的表达与Kupffer细胞数呈正相关，而SSeCKS的表达与Kupffer细胞数呈负相关。结论：Hck、Lyn和SSeCKS参与了NASH的发生发展，可作为NASH炎症反应的潜在调控靶点；检测其表达有助于NASH炎症程度的判断，为临床上治疗NASH提供一定的客观依据。
关键词： Hck Lyn src抑制的蛋白激酶C底物 Kupffer细胞 炎症 -
HCK基因在大鼠胚胎心脏发育过程中的表达
目的 检测HCK基因在大鼠胚胎心脏过程中的mRNA表达变化,分析其与心脏发育的关系.方法 取大鼠胚胎d12、d15、d19心脏,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测心脏组织中HCK基因mRNA的表达丰度,并应用原位杂交的方法对其进行定位分析.结果 在胚胎d12、d15、d19心脏中,HCK基因均有表达,但主要表达于心脏间质,在心肌细胞中不表达,其表达丰度分别为(0.19±0.09),(0.38±0.07),(0.59±0.10),随胚龄的增长有上调趋势(P＜0.05).结论 HCK基因表达于心脏间质,在心肌细胞中不表达,并随大鼠胚胎心脏的生长发育呈动态表达,HCK可能与心脏发育相关.
