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瑞巴派特对阿司匹林所致人结肠癌细胞株Caco-2损伤的保护作用及其机制探讨
随着胶囊内镜的问世，非甾体消炎药（ NSAIDs）引起的小肠损伤日益受到重视。虽然有多种用于防治NSAIDs 相关胃黏膜损伤的药物，但对于NSAIDs 相关小肠黏膜损伤，至今仍缺乏有效的防治措施。目的：探讨瑞巴派特对阿司匹林所致人结肠癌细胞株Caco-2损伤的保护作用及其可能机制。方法：以经阿司匹林10 mmol/ L 处理的Caco-2细胞作为阿司匹林组，经阿司匹林联合不同浓度（0.1、0.5、1.0 mmol/ L）瑞巴派特处理的Caco-2细胞作为瑞巴派特组，同时设立阴性对照组。采用MTT 实验检测细胞增殖抑制情况；采用流式细胞术检测细胞凋亡情况；采用倒置相差显微镜观察细胞形态学变化；采用Transwell 实验检测细胞通透性；采用蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白occludin、闭锁小带蛋白-1（ZO-1）以及丝裂原活化蛋白激酶（ MAPK）信号通路相关蛋白细胞外信号调节激酶（ERK）1/2、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）、p38、p-p38、c-Jun 氨基端激酶（JNK）、p-JNK 表达。结果：瑞巴派特0.1、0.5、1.0 mmol/ L组Caco-2细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、细胞通透性均显著低于阿司匹林组（ P <0.05），且随瑞巴派特浓度升高而逐渐降低（P <0.05）。倒置相差显微镜观察显示，阿司匹林可诱导Caco-2细胞损伤，而瑞巴派特可减轻阿司匹林引起的细胞损伤。与阿司匹林组相比，瑞巴派特0.1、0.5、1.0 mmol/ L 组occludin、ZO-1、p-JNK 表达显著升高（P <0.05），p-p38、p-ERK1/2表达显著降低（P <0.05），变化均呈瑞巴派特浓度依赖性（ P <0.05）。结论：瑞巴派特可能通过调节MAPK 信号通路（抑制p38、ERK1/2磷酸化，促进JNK 磷酸化），使紧密连接蛋白表达上调、细胞通透性降低，从而防治阿司匹林所致Caco-2细胞损伤。
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人工合成E-选择素对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响
目的探讨人工合成E-选择素对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性以及紧密连接咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1含量表达的影响。方法180只SD大鼠随机分为假手术组(用线栓法将线栓插入颈内动脉及颈外动脉分叉处，其余操作同模型组)、模型组(用改良 Zea Longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型)、治疗组(建模前10 min从股静脉缓慢注射人工合成E-选择素10 mg·kg-1)。每组分为3、6、24、48和72 h 5个时间点(每个时间点大鼠n=12)，应用多功能酶标仪测量血脑屏障对伊文思蓝(EB)的通透性，应用免疫组化法和Western blot法测定咬合蛋白及闭锁小带蛋白-1的表达含量。结果与假手术组比较，模型组缺血再灌注损伤后3 h脑组织EB含量开始上升，6 h继续上升，24 h达峰值，48~72 h下降但仍高于初始值；治疗组各时间点EB含量均低于模型组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。模型组咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1的表达都于缺血再灌注3 h开始下降，6 h继续下降，24 h达低值，48~72 h上升但低于初始值；治疗组各时间点咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1的表达含量均高于模型组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论人工合成E-选择素可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤造成的血脑屏障破坏，其机制可能与抑制紧密连接咬合蛋白和闭锁小带蛋白-1表达的减少有关。
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闭锁小带蛋白-1及其在癌发生发展中的作用
闭锁小带蛋白-1 (zonula occluden-1,ZO-1)是第一个被发现的紧密连接蛋白,基因定位于染色体15q13,属于膜结合鸟苷酸激酶(membraneassociated guanylate kinase,MAGUK)家族的膜相关骨架蛋白[1-2].自从发现该蛋白以来,国内外对于其在细胞生理病理过程中的作用进行了大量研究,发现ZO-1在维持上皮组织正常结构和功能,参与调控细胞分化、增殖和迁移等生理活动中有着重要作用.而癌症作为常见的上皮组织来源的恶性肿瘤,目前是医学界临床和基础研究的重点之一.ZO-1在多种癌组织中有着不同程度的表达,而且表达程度与癌症分级、预后等有密切的关联.本文就ZO-1的结构及其与癌症关系的研究进展进行综述,并对其在口腔癌症研究的前景进行探讨.
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胆汁外引流对梗阻性黄疸大鼠肠黏膜紧密连接影响的实验研究
目的 探讨胆汁在保护小肠黏膜屏障中的作用及其机理.方法 50只Wistar大鼠随机分为对照组(n=10)、梗阻性黄疸(阻黄)组(n=20)及外引流组(n=20).造模10 d后测定血浆内毒素水平; 取末端回肠黏膜组织,光镜下观察黏膜形态改变并测量相关指标,采用免疫组化及Western blot法检测紧密连接相关蛋白(闭锁小带蛋白-1及闭锁蛋白)的表达.结果 阻黄组小肠黏膜萎缩明显,其肠绒毛高度、黏膜厚度和隐窝深度与对照组相比分别下降27.8%、21.7%和25.4%(P=0.001、0.001、0.040); 外引流组各指标较对照组无明显变化(P=0.050、0.070、0.080),而明显优于阻黄组(均P=0.001).阻黄组的血浆内毒素水平高达(1.49±0.27) EU/ml,明显高于对照组的(0.27±0.09) EU/ml(P=0.001); 外引流组为(0.91±0.25) EU/ml,高于对照组而低于阻黄组(P=0.001).免疫组化结果显示,闭锁小带蛋白-1的强阳性表达从对照组的7/10例降至阻黄组的6/20例(P=0.040),闭锁蛋白则从8/10例降至7/20例(P=0.020); 而外引流组分别为8/20例(P=0.100、0.210)和9/20例(P=0.060、0.200),与前2组相比差异均没有统计学意义.Western blot分析显示,阻黄组闭锁小带蛋白-1和闭锁蛋白的表达水平较之对照组均明显下降(P=0.001、0.010); 外引流组高于阻黄组(P=0.005、0.014),而闭锁小带蛋白-1的表达水平低于对照组(P=0.001),闭锁蛋白的表达与对照组比较差异无统计学意义(P=0.062).结论 肠道内胆汁缺乏会破坏肠紧密连接相关蛋白的成分,损伤肠黏膜屏障; 胆道梗阻时由于存在其他因素,肠黏膜屏障损伤更严重.胆汁在保护肠黏膜屏障中具有重要作用.
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急性重症胰腺炎患者肠黏膜及外周血中闭锁小带蛋白-1以及白介素-18的表达及其意义
目的 探讨急性重症胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)患者肠黏膜中闭锁小带蛋白-1(ZO-1)以及白介素-18(IL-18)的表达及其意义.方法 选择110例急性胰腺炎患者,分为SAP组(50例)和轻症组(60例),另外选取50例健康者为对照组,分别检测肠黏膜组织及血清中ZO-1以及IL-18的表达情况.结果 ZO-1在SAP组患者肠黏膜组织中的表达明显低于轻型组以及对照组,差异有显著性(P＜0.05);而IL-18的表达明显高于轻型组以及对照组,差异有显著性(P＜0.05).SAP组和轻症组患者血清中ZO-1及IL-18在入院后12小时内均逐渐升高,SAP组血清中ZO-1及IL-18的含量在6小时及12小时均明显高于轻型组及对照组(P＜0.05).SAP患者肠黏膜组织中ZO-1及IL-18的表达呈显著负相关(r=-0.419,P=0.013);而血清中ZO-1及IL-18在6小时及12小时含量均呈正相关(r=0.529,r=0.584,P均=0.000).结论 SAP患者肠黏膜屏障破坏严重,肠黏膜组织中ZO-1表达降低,而IL-18表达升高,这有助于判断患者病情严重程度并指导临床治疗.
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闭锁小带蛋白-1在脑外伤后皮质中的表达变化
目的：观察闭锁小带蛋白-1（zonula occludens-1，ZO-1）在脑外伤后皮质中不同时段的表达变化。方法建立小鼠脑外伤模型，分为脑外伤后1h、3h、6h、12h、24h、3d、7d组，同时设立假手术组及正常对照组。脑皮质中伊文思蓝（Evans blue，EB）含量检测评估血脑屏障通透性，Western印迹法和免疫组织化学染色法检测损伤皮质区ZO-1的表达。结果脑外伤后1 h皮质中EB含量开始增加，伤后1~3 d达高峰，伤后7 d接近正常。 Western印迹法显示，ZO-1在损伤1 h后表达下调，损伤1~3 d达到低值，损伤7 d后明显回升，但仍低于假手术组和正常对照组。免疫组织化学染色显示，正常脑皮质血管中ZO-1呈强阳性表达，损伤后表达逐渐减弱，损伤3 d后阳性表达几乎消失，之后逐渐恢复。结论 ZO-1在脑外伤后皮质区呈先降低后升高的表达规律，与脑外伤后血脑屏障通透性变化规律呈负相关，为推断脑外伤损伤时间提供了新指标。
