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大片形吸虫排泄分泌产物对体外培养LO2人肝细胞的影响
目的 初步探讨大片形吸虫排泄分泌产物(FgESP)对体外培养LO2人肝细胞的增殖及对肝细胞损伤相关的生化指标的影响.方法 将LO2人肝细胞分为5个密度组(1 000、3 000、5 000、7 000、10 000个/孔),铺于96孔板中,空白对照组只加入培养基,根据LO2细胞生长曲线选择适细胞铺板密度.在96孔板中,以适细胞密度铺板,分为0.02、0.10、0.20、0.40、1.00 mg/ml FgESP等5组,每组设4个重复,以PBS作为阴性对照组,在培养箱中孵育4、8、12、24、48和72 h后进行MTT细胞活性检测,测吸光度(A490值).在24孔板中,分为0.02、0.10、0.20、0.40、1.00 mg/ml FgESP等5组,每组设3个重复,以PBS作为阴性对照组,分别在培养4、8、12、24、48和72 h后,收集LO2细胞上清,测定碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)的含量.采用GraphPad Prism 6.0软件进行统计学分析.结果 根据LO2人肝细胞生长曲线,筛选出5 000个/孔为96孔板佳铺板密度.FgESP作用72 h后,MTT细胞活性检测结果显示,0.02、0.10、0.20、0.40、1.00 mg/ml FgESP等5组的A 490值分别为1.29±0.01、1.28±0.06、1.13±0.08、0.97±0.06、0.25±0.01,均低于对照组(1.45±0.05) (P＜ 0.01).生化指标检测结果显示,0.40、1.00 mg/ml FgESP作用细胞LO2人肝72 h后,ALT含量分别为2.00±0.00、3.67±0.58,AST含量分别为5.33±0.58、7.67±0.58,均高于对照组的(P＜0.01);作用48 h后,1.00 mg/ml FgESP组ALT、AST含量分别为2.00±0.00、7.00±0.00,高于对照组的0.33±0.58、3.67±0.58 (P＜ 0.01);在12～72 h内,0.10、0.20、0.40、1.00 mg/mlFgESP作用后ALP含量升高(P＜0.01),而0.02 mg/ml FgESP仅在作用72 h后ALP含量升高(P＜0.01);各实验组ALB含量与阴性对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 FgESP体外作用可抑制LO2人肝细胞增殖能力,且细胞增殖的抑制及损伤程度与FgESP的浓度相关.
