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马来丝虫肌球蛋白29表位基因真核表达质粒及原核表达蛋白免疫小鼠诱导的免疫应答
目的 观察马来丝虫肌球蛋白29(Brugia malayi myosin 29,BmM29)表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmM29和原核表达的纯化重组蛋白rBmM29免疫小鼠诱导的免疫应答效果. 方法 在大肠埃希菌(Escherichia coli BL21诱导表达重组蛋白rBmM29,纯化后作为重组蛋白疫苗;纯化真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-BmM29作为核酸疫苗.核酸疫苗免疫注射部位为小鼠后腿胫前肌,重组蛋白为皮下多点注射.60只BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D、E组,每组12只,分别注射PBS(100 μg)、pcDNA3.1(+)/CpG(100 μg/30 μg)、pcDNA3.1(+)-BmM29/CpG(100μg/30 μg)、rBmM29/CpG(50 μg/30 μg)、pcDNA3.1(+)-BmM29/rBmM29/CpG(前2次注射pcDNA3.1 (+)-BmM29/CpG 100 μg/30 μg,第3次注射rBmM29/CpG 50 μg/30 μg),共免疫3次,每次免疫间隔2周.初次免疫后第4、6、8周,眼球摘除法采血制备血清,ELISA法检测免疫小鼠血清特异性IgG抗体效价.免疫第8周处死小鼠,制备脾细胞悬液培养48 h,ELISA检测培养上清中细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4 (IL-4)水平. 结果 ELISA检测结果显示,A、B、C、D和E组小鼠初次免疫后第4周血清中抗体的吸光度(A490值)分别为0.038±0.050、0.053±0.009、0.360±0.035、0.456±0.025、0.370±0.025,第6周分别为0.045±0.003、0.045±0.005、0.510±0.018、0.548±0.010、0.552±0.018,第8周分别为0.041±0.004、0.044±0.009、0.606±0.047、0.674±0.042、0.770±0.041,C、D、E组均高于A、B组(P＜0.05),第8周时,E组IgG抗体的A490值高于C组和D组(P＜0.05).初次免疫后第8周,A至E组小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ的水平分别为(47.72±8.94)、(50.43±2.81)、(304.78±8.42)、(242.28±5.99)、(426.52±6.76) pg/ml,C、D、E组均高于A、B组(P＜0.05),E组高于C组和D组(P＜0.05);小鼠脾细胞培养上清中IL-4的水平分别为(60.00±11.14)、(57.71±15.95)、(93.17±12.56)、(96.67±11.48)、(101.17±5.81) pg/ml,C、D、E组均高于A、B组(P＜0.05). 结论 pcDNA3.1(+)-BmM29核酸疫苗和rBmM29重组蛋白均可诱导BALB/c小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答,核酸疫苗与重组蛋白疫苗联合免疫效果更佳.
关键词： 马来丝虫 肌球蛋白29表位基因 重组蛋白 基因疫苗 蛋白疫苗
