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家蝇发育过程中肠道可培养共生细菌的分离与鉴定
目的 研究家蝇(Musca domestica)不同发育阶段肠道中可培养共生细菌的组成. 方法 在无菌条件下,对不同发育阶段家蝇虫体进行体表消毒.对卵和孵化1d的幼虫,取5枚卵或5条幼虫,加1 ml无菌水研磨;对孵化2d以上的幼虫、蛹和成蝇,各虫期分别取5条,解剖出肠道,加1 ml无菌水研磨.取研磨液按传统分离培养法分离和鉴定家蝇肠道的共生细菌,挑取形态有差异的单菌落,置于LB培养基中小量培养,提取菌体DNA,PCR扩增16S rDNA基因,测序后在GenBank中进行比对,鉴定到属.计数家蝇不同虫期肠道中分离的细菌菌属数的变化情况. 结果 通过培养分离出家蝇各阶段肠道共生细菌26属,其中,卵期未分离到共生细菌,幼虫期分离到11属,蛹期分离到19属,成蝇分离到14属.不同虫期之间存在重复,幼虫期和蛹期共有的细菌有6属,分别为变形杆菌属(Proteus)、库特氏菌属(Kurthia)、博德特氏菌属(Bordetella)、微杆菌属(Microbacterium)、产碱杆菌属(Alcaligenes)和明串球菌属(Leuconostoc);蛹期和成蝇共有的细菌有3属,分别为鞘氨醇杆菌属(Sphingob ac te rium)、肠球菌属(Enterococc us)、苍白杆菌属(Ochrobactrum);幼虫期和成蝇共有的细菌有1属,为克雷伯菌属(Klebsiella);3个虫态共有的细菌有4属,分别为普罗威登斯菌属(Provide ncia)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、香味菌属(Myroides)和假单胞菌属(Pseudomonas).幼虫期、蛹期和成蝇革兰阳性菌的比例分别为4/11、6/19和3/14. 结论 在家蝇由幼虫经蛹发育到成蝇的过程中,其肠道中可培养细菌菌属数呈先上升后下降趋势,革兰阳性菌的比例逐渐下降.
