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Derf3文献资料
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粉尘螨3类变应原基因的克隆、表达、纯化与变应原性鉴定
目的 克隆表达粉尘螨3类变应原(Derf3)基因,并鉴定纯化蛋白的变应原性.方法 取华南地区采集经实验室培养的粉尘螨(约500只)提取总RNA,经RT-PCR扩增Derf3基因.将目的基因克隆到pET-His表达载体上得到重组质pET-Derf3.大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导培养,表达Derf3目的蛋白.重组rDerf3蛋白经6His-tag蛋白纯化系统进行分离、纯化,蛋白质印迹法(Western blotting)分析该纯化Derf3蛋白与粉尘螨过敏患者血清IgE反应性,以鉴定重组Derf3的变应原性.结果 以粉尘螨总RNA为模板克隆出Derf3基因,该基因与GenBank(D63858)公布的Derf3比较有4个核苷酸差异,但同源性为99.5%.E.coliBL21(DE3)经IPTG诱导后高效表达Derf3重组蛋白,主要以包涵体形式存在.经Western blotting分析该重组蛋白Derf3能与粉尘螨过敏患者血清的IgE反应,而不与健康者血清IgE反应.结论 构建了华南地区粉尘螨3类变应原的原核表达载体,并高效表达和纯化出具变应原性的Derf3重组蛋白.
