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淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因克隆和序列分析
目的获取淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因. 方法通过正、反向抑制性差减杂交获取对溴氰菊酯抗药性和敏感性淡色库蚊的差异表达基因,并以基因芯片和逆Northern对所获基因进行杂交鉴定. 结果正、反向抑制性差减杂交各获得523和286个克隆,经芯片鉴定后在抗性品系高表达的基因分别有 155个(2～3倍)和42个(3倍以上),在敏感品系中高表达的基因分别有15个(2～3倍)和9个(3倍以上).对3 倍以上差异表达和特异表达基因进行单向测序,根据高同源性比对结果,线粒体rRNA基因、60S核糖体蛋白基因、40S核糖体蛋白S4基因、胰蛋白酶前体基因、糜蛋白酶A前体基因、视蛋白基因等在抗性品系中高表达;而40S核糖体蛋白S29基因和肌球蛋白调控轻链2在敏感品系中高表达;另外,1,4-α-葡聚糖分支酶和核糖体蛋白46基因在抗性品系中特异表达. 结论所获得的13个差异表达基因和2个特异表达基因与淡色库蚊对溴氰菊酯的抗药性和敏感性相关.
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淡色库蚊细胞色素P450抗性相关基因克隆与初步鉴定
[目的]探讨淡色库蚊细胞色素P450与溴氰菊酯抗药性的关系.[方法]采用一对昆虫细胞色素P450简并引物,以反转录-聚合酶链反应从淡色库蚊扩增特异片段,T/A直接克隆法筛选阳性克隆,对新序列进行cDNA芯片和逆Northern分析.[结果]从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系获得112个阳性克隆,其中24个阳性克隆测序后显示为细胞色素P450新序列,由GenBank登录上网;经国际细胞色素P450命名委员会鉴定分别属CYP4家族CYP4C、CYP4D、CYP4H和CYP4J等4个亚家族;24个CYP4 cDNA片段中,来自敏感品系的2个片段(NYDS3和NYDS5)和来自抗性品系的4个片段(NYDR6、NYDR9、NYDR15和NYDR17)在两品系间存在差别,cDNA芯片信号亮度值均是抗性品系大于敏感品系,倍数在3.1～9.7范围内;NYDR17仅与抗性探针杂交;逆Northern再鉴定,获得了与cDNA芯片一致的结果.[结论]淡色库蚊CYP4与溴氰菊酯抗性相关;在淡色库蚊溴氰菊酯抗性机理中,可能存在P450基因点突变而导致的特异表达.
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用核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性
目的用淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关胰蛋白酶核酸探针检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性.方法用逆Northern鉴定抗药性品系和敏感品系中胰蛋白酶的表达差异,用随机引物法标记鉴定后的胰蛋白酶cDNA片段为探针Northern blot检测淡色库蚊的抗药性.结果逆Northern显示胰蛋白酶在抗药性品系中的表达量是敏感品系的4.33倍.以其为探针Northern blot检测显示,胰蛋白酶基因在抗药性品系中高表达,抗药性品系中胰蛋白酶的表达量是敏感品系的3.90倍.结论作为一种新的抗药性检测的分子生物学方法,胰蛋白酶核酸探针可用于区分抗药性品系和敏感品系.
关键词： 淡色库蚊 抗药性 敏感性 逆Northern Northern blot
