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人精子间期核的双色荧光原位杂交
目的建立人精子间期核双色荧光原位杂交(dud-color fluorescence in situhybridization,D-FISH)的实验方法.方法采用双色荧光原位杂交技术对12例正常精子标本进行间期核的原位杂交,并统计精子间期核X、Y染色体的杂交信号颗粒数量.结果在显微镜下可见精子头部有以Bioton标记的pBamX7探针显示1个绿色杂交信号为X染色体精子(X精子),以Digoxigenin标记的pY3.4探针显示1个红色杂交信号为Y染色体精子(Y精子);精子头部有2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子(如XX、XY、YY精子);间期核背景经DAPI复染显示蓝色;统计12例正常精子标本总共4800个精子间期核,X精子杂交信号阳性率为48.56%,Y精子杂交信号阳性率为49.73%,总共统计24000个精子,3种双体总杂交率为0.197%.结论本法具有荧光杂交信号直观易分辨、短时间内能大量分析精子数量和实验操作相对简便、结果准确可信等优点.
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介绍一种应用双色荧光复位杂交检测人精子染色体数目异常的技术
研究人类精子染色体常用的方法有两种,一种是用人类精子体外穿透金黄地鼠卵[1],这个方法虽然可以观察到精子的全部染色体组成,但由于这个方法操作复杂,十分耗时,且只适合于可以穿透金黄地鼠卵的精子,因而在临床上受到很大限制,推广起来也很困难.
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用双色荧光原位杂交技术检测罗伯逊易位携带者的精子染色体
目的: 探讨用双色荧光原位杂交技术(D-FISH)检测罗伯逊易位携带者的精子染色体的实验方法和应用价值. 方法: 采用荧光原位杂交(FISH)技术,以Biotin标记的13q14.3特异性探针和以Digoxigenin标记的14q11.1特异性探针对2例罗伯逊易位携带者精子标本进行原位杂交,并统计精子间期核13、14号染色体的杂交信号颗粒数量. 结果: 在显微镜下可见精子头部有以Biotin标记的13q14.3特异性探针显示1个绿色杂交信号,以Digoxigenin标记的14q11.1特异性探针显示1个红色杂交信号,间期核背景经DAPI复染显示蓝色;共统计3 000个精子间期核,显示1个绿色1个红色杂交信号的精子为13q/14q,占39.33%;显示1个绿色2个红色杂交信号为13q/14q,14q, 占11.57%;仅显示1个绿色杂交信号为13q/-,占9.27%;显示2个绿色1个红色杂交信号为13q,13q/14q,占12.87%;仅显示1个红色杂交信号为-/14q,占9.87%;显示2个绿色2个红色杂交信号为13q,13q/14q,14q,占12.26%. 结论: 用双色荧光原位杂交技术检测染色体结构异常患者的精子,可以分析其减数分裂过程中染色体分离规律,在人类生殖如显微授精和植入前胚胎遗传学诊断等方面具有非常广泛的应用价值.
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一种快速稳定的人精子核双色荧光原位杂交技术的建立
目的:建立快速稳定的人精子核双色荧光原位杂交的实验方法.方法:采用双色荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH )方法取精子标本用EDTA/PBS液处理,再用二硫苏糖醇(DTT)使精子去凝集,甲醇/冰醋酸固定后制片,变性后与双色荧光直接标记(CEP X、Y)探针杂交.结果:在荧光显微镜下可见标本背景清晰,精子头部染成蓝色,边界清楚,头部有1个绿色荧光信号的精子为X精子,有1个红色荧光信号的精子为Y精子.精子头部有2个或2个以上信号的精子为染色体数目异常精子.结论:本方法具有快速、稳定、荧光信号强、易分辨等优点,可用于人性染色体非整倍体率的分析研究.
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双色FISH检测人精子染色体非整倍体方法的建立
目的:建立用双色FISH检测人精子染色体非整倍体的方法.方法:采用双色荧光原位杂交(FISH)方法取适量精子标本用EDTA/PBS处理,然后用二硫苏糖醇(DTT),使精子去凝集.固定后滴片,然后与双色荧光直接标记探针杂交.结果:在OLYMPUS荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的蓝色杂交信号,头部有1个绿色荧光杂交信号的精子为X染色体精子(X精子),有1个红色荧光杂交信号的精子为Y染色体精子(Y精子).精子头部有2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子.结论:双色荧光原位杂交(FISH)方法可以用于测定人精子染色体非整倍体率的变化.
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用双色荧光原位杂交检测人精子染色体非整倍体率
目的 检测人精子染色体非整倍体率.方法 采用双色荧光原位杂交(FISH)方法,取少量精标本经洗后制片,用二硫苏糖醇(DTT)和二碘水杨酸锂(LIS)处理,使精子头部染色质去凝集.然后,与生物素标记的α卫星X染色体特异DNA探针(DXZ1)和地高辛标记的α卫星Y染色体特异DNA探针(DYZ3)进行原位杂交.用CY3-链亲和素、山羊抗链亲和素检测X染色体探针杂交信号;用鼠抗地高辛抗体、与荧光素结合的兔抗鼠抗体检测Y染色体探针杂交信号.结果 在Nikon荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的杂交信号,头部有1个红色荧光杂交信号的精子为X染色体精子(X精子),有1个绿色荧光杂交信号的精子为Y染色体精子(Y精子).精子头部有2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子.若用1条常染色体探针和1条性染色体探针进行FISH,可以区别头部有2个相同颜色荧光杂交信号的精子属非整倍体精子或二倍体精子.结论 双色荧光原位杂交(FISH)方法,可以用于测定接触致突变剂和非整倍体诱导剂后,人精子染色体非整倍体率的变化.
