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降调节对卵子质量的影响
近10余年来,在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中应用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)进行控制性卵巢刺激(COS)已成为普遍采用的方法,其主要原因是GnRH-a可以促进卵巢内多个卵泡同步发育和成熟,抑制内源性黄体生成素(LH)峰,阻遏卵泡过早黄素化及卵子早熟.
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1-18 苯、CS2诱导小鼠卵母细胞染色体非整倍体率增高
目的研究苯,CS2对卵母细胞染色体非整倍体率的影响.方法成年雌性NIH小鼠,1次灌胃,苯(942、1 881、3 762 mg/kg),CS2(372、744、1 488 mg/kg)和多次吸入染毒,苯(706、1 922、4 864 mg/m3);CS2(199、651、1 209 mg/m3),染毒后收集MII卵母细胞,作细胞遗传学分析,测定染色体非整倍体率.结果在灌胃组,苯仅见高剂量组MII卵母细胞非整倍体率(5.64%)高于对照组;CS2 3个剂量组MII卵母细胞染色体非整倍体率分别为4.88%、6.82%、6.82%,与对照组(0.78%)比较,差异均有显著性(P＜0.05).小鼠吸入染毒,苯、CS2各3个剂量组MII卵母细胞染色体非整倍体率分别为7.06%、7.50%、9.76%和6.60%、12.00%、10.00%.与对照组(1.30%)比较,差异均有显著性(P＜0.05).同时也观察到苯、CS2染毒后,第1次减数分裂(MI)卵母细胞停滞,MI卵母细胞率高于对照组(P＜0.05).结果提示苯、CS2有致非整倍体作用.结论高剂量苯、CS2可诱导小鼠MII卵母细胞非整倍体率增高.
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人精子荧光原位杂交技术与男性不育
研究人类精子染色体非整倍体是当今生殖医学领域的又一热点.早在1978年人们就用去透明带的仓鼠卵做精子穿透试验,进行精子非整倍体的研究,此项研究方法学复杂,不适合大样本量研究.近十年来应用荧光原位杂交(fluores-cence in situ hybridization,FISH)技术可以对成千上万条精子进行检测,大大促进了精子非整倍体的研究.这项技术已用于许多男性不育的非整倍体率的研究.初的研究使用单色探针,其缺陷是不能区分精子染色体二体和二倍体.双色FISH就可鉴别二体和二倍体精子,近来的研究采用多色FISH,同时对精子的多条染色体进行非整倍体的研究,能够更全面地了解非整倍体率与男性不育的关系.
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二硫化碳对小鼠卵母细胞及受精卵雌原核染色体非整倍体率的影响
目的 研究二硫化碳(CS2)对卵 母细胞和受精卵雌原核染色体非整倍体率的影响。方法 用CS2给成年雌性NIH小鼠一次性灌胃(372、744、1 488 mg /kg)和多次吸入(199、651、1 209 mg/m3)染毒，灌胃后雌、雄鼠以1∶1同笼过夜， 收集卵母细胞和受精卵作细胞遗传学分析，检测非整倍体率。结果 CS2一次性灌胃(372、744、1 488 mg/kg)和多次吸入(199 、651、1 209 mg/m3)诱导的小鼠MⅡ卵母细胞染色体非整倍体率分别为4.88%、6.82% 、6.82%和6.60%、12.00%、10.00%，与对照组(0.78%、1.30%)比较，差异有显著性 (P<0.05)。CS2一次性灌胃诱导的小鼠受精卵雌原核染色体非整倍体率为2.18%、6.98 %、7.40%，后两组与对照组(1.02%)比较，差异亦有显著性(P<0.05)。结 论 接触CS2可诱导小鼠MⅡ卵母细胞和受精卵雌原核染色体非整倍体率增 高。
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双色荧光原位杂交法检测锰作业工人精子染色体非整倍体率
目的 探讨锰对精子性染色体数目畸变的影响.方法 用X、Y染色体特异DNA 探针与锰作业男工精子行双色荧光原位杂交,同时测定X和Y精子染色体非整倍体率.结果 对6位锰作业工人共计数13 203条精子与6位正常对照组工人共计数13 032条精子进行比较,结果显示接触组精子X双体率、Y双体率、Xy双体率及总双体率均高于对照组(P<0.05).结论 锰作业工人精子性染色体非整倍体率增加.
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荧光原位杂交技术在检测人精子染色体异常中的应用进展
荧光原位杂交技术(FISH)以其快速、简便、高灵敏度及高特异性的优点,可一次检测成千上万精子染色体而被广泛应用,并逐渐成为检测精子染色体的首选方法.本文总结近10年来国内外相关文献,将FISH技术在检测正常人、不育者、染色体平衡易位者、有毒物接触者及肿瘤患者化疗后精子染色体异常方面的应用加以综述.
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人精子间期核的双色荧光原位杂交
目的建立人精子间期核双色荧光原位杂交(dud-color fluorescence in situhybridization,D-FISH)的实验方法.方法采用双色荧光原位杂交技术对12例正常精子标本进行间期核的原位杂交,并统计精子间期核X、Y染色体的杂交信号颗粒数量.结果在显微镜下可见精子头部有以Bioton标记的pBamX7探针显示1个绿色杂交信号为X染色体精子(X精子),以Digoxigenin标记的pY3.4探针显示1个红色杂交信号为Y染色体精子(Y精子);精子头部有2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子(如XX、XY、YY精子);间期核背景经DAPI复染显示蓝色;统计12例正常精子标本总共4800个精子间期核,X精子杂交信号阳性率为48.56%,Y精子杂交信号阳性率为49.73%,总共统计24000个精子,3种双体总杂交率为0.197%.结论本法具有荧光杂交信号直观易分辨、短时间内能大量分析精子数量和实验操作相对简便、结果准确可信等优点.
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用双色荧光原位杂交检测人精子染色体非整倍体率
目的 检测人精子染色体非整倍体率.方法 采用双色荧光原位杂交(FISH)方法,取少量精标本经洗后制片,用二硫苏糖醇(DTT)和二碘水杨酸锂(LIS)处理,使精子头部染色质去凝集.然后,与生物素标记的α卫星X染色体特异DNA探针(DXZ1)和地高辛标记的α卫星Y染色体特异DNA探针(DYZ3)进行原位杂交.用CY3-链亲和素、山羊抗链亲和素检测X染色体探针杂交信号;用鼠抗地高辛抗体、与荧光素结合的兔抗鼠抗体检测Y染色体探针杂交信号.结果 在Nikon荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的杂交信号,头部有1个红色荧光杂交信号的精子为X染色体精子(X精子),有1个绿色荧光杂交信号的精子为Y染色体精子(Y精子).精子头部有2个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子.若用1条常染色体探针和1条性染色体探针进行FISH,可以区别头部有2个相同颜色荧光杂交信号的精子属非整倍体精子或二倍体精子.结论 双色荧光原位杂交(FISH)方法,可以用于测定接触致突变剂和非整倍体诱导剂后,人精子染色体非整倍体率的变化.
