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大鼠失神经腓肠肌细胞内FoxO3a及MuRF-1的表达规律
目的 探讨失神经大鼠腓肠肌细胞中叉头蛋白转录因子3a(fork-head protein,FoxO3a)及MuRF-1的表达规律.方法 72只Wistar大鼠随机分为12组,每组6只,切断大鼠右侧坐骨神经,左侧行假手术,分别于术后0、1、2、3、4、5、6、7、10、14、21、28d各处死一组大鼠,取右侧腓肠肌,于-70℃冰箱保存.分别使用实时荧光定量PCR法和Western Blot法对其中的FoxO3a和MuRF-1的基因和蛋白进行检测.结果 MuRF-1的基因表达在失神经第4天达到峰值(18.12倍),失神经14d后下降至正常.FoxO3a的基因表达在失神经第6天达到峰值(7.06倍),而后虽缓慢下降,但仍高表达.FoxO3a和MuRF-1的蛋白含量随失神经时间的延长逐渐升高.结论 FoxO3a和MuRF-1的表达和蛋白改变与失神经骨骼肌萎缩关系密切,可以作为药物治疗和基因治疗的靶点之一.
关键词： 肌萎缩 大鼠 失神经 叉头蛋白转录因子3a MuRF-1 -
保元解毒汤改善癌性恶病质模型小鼠骨骼肌萎缩的实验研究
目的:复制癌性恶病质模型,探讨保元解毒汤对癌性恶病质模型骨骼肌萎缩的影响.方法:用Lewis肺癌细胞株皮下接种C57BL/6小鼠,复制肺癌恶病质小鼠模型.40只小鼠随机分为四组:正常对照组、模型对照组、中药干预组和醋酸甲羟孕酮组.HE染色后测量小鼠肌纤维横径,免疫组化法测定小鼠腓肠肌中Atrogin-1、MuRF-1的蛋白表达水平.结果:①形态学观察结果与实验数据结果一致.②与正常对照组比较,模型对照组腓肠肌肌纤维横径明显减小(P＜0.01);与模型对照组和醋酸甲羟孕酮组比较,中药干预组腓肠肌肌纤维横径明显增加(P＜0.01);③与正常对照组比较,模型对照组Atrogin-1、MuRF-1的蛋白表达水平明显增强(P＜0.01);与模型对照组和醋酸甲羟孕酮组比较,中药干预组肌肉中Atrogin-1、MuRF-1的蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论:保元解毒汤可增加恶病质模型肌纤维横径,降低肌肉中Atrogin-1、MuRF-1的蛋白表达,改善恶病质骨骼肌萎缩.
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保元解毒汤对癌性恶病质小鼠骨骼肌蛋白质降解及MAFbx、 MuRF-1基因表达的影响
目的 研究保元解毒汤对肺癌恶病质小鼠骨骼肌蛋白质降解及MAFbx、MuRF-1基因表达的影响,探讨其干预骨骼肌蛋白质代谢的可能机制.方法 C57BL/6小鼠皮下接种Lewis肺癌细胞株复制肺癌恶病质小鼠模型.40只小鼠随机分为正常对照组、模型组、保元解毒汤组和醋酸甲羟孕酮组.测定小鼠腓肠肌质量;高效液相色谱法检测腓肠肌3-甲基组氨酸(3-MH)含量;RT-PCR法测定腓肠肌MAFbx、MuRF-1mRNA表达.结果 与正常对照组比较,模型组小鼠腓肠肌质量显著降低(P＜0.05),肌组织内3-MH含量明显升高(P＜0.05),MAFbx、MuRF-1 mRNA表达显著升高(P＜0.05);与模型组和醋酸甲羟孕酮组比较,保元解毒汤组小鼠腓肠肌质量显著增加(P＜0.05),肌组织内3-MH含量明显降低(P＜0.05),MAFbx、MuRF-1 mRNA表达显著降低(P＜0.05).结论 保元解毒汤能够改善癌性恶病质小鼠骨骼肌萎缩,其机制可能与MAFbx、MuRF-1基因表达下调,骨骼肌收缩蛋白降解减少相关.
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外源性肿瘤坏死因子-α刺激大鼠心脏MuRF-1表达
目的:研究外源性肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)对大鼠心脏肌肉环指蛋白-1(Muscle ringfinger-1,MuRF-1)表达的影响.方法:将造模成功且24 h后仍存活的40只大鼠随机分为:①心肌梗死(Myocardial infarction,MI)+TNF-α组:结扎左冠状动脉前降支(Left anterior desending,LAD),腹腔内注射TNF-α 100 ng/(g·d)(溶于2ml生理盐水);②MI组:结扎LAD,腹腔内注射2ml/d生理盐水;③假手术(Sham)+TNF-α组:假手术后,腹腔内注射TNF-α100 ng/(g·d)(溶于2ml生理盐水);④Sham组:手术过程同心肌梗死组,但只穿线通过LAD支不打结,腹腔内注射2ml/d生理盐水.所有腹腔内注射持续7周后,取心肌组织进行HE染色及电镜观察心脏结构变化,荧光定量PCR及Western blot检测各组大鼠左心室心肌MuRF-1的mRNA及蛋白质表达.结果:与MI组及TNF-α组相比,MI+TNF-α组心肌组织学结构及超微结构明显受损,大量炎症细胞浸润,心肌纤维断裂,疤痕组织形成,细胞核裂解,线粒体增生、空泡化.MI组MuRF-1的mRNA及蛋白质水平分别为1.81±0.8和0.9±0.25,Sham+TNF-α组为1.534±0.96和1.12±0.76,较Sham组明显升高(0.84±0.2和0.27±0.15),P<0.05;与MI组相比,MI+TNF-α组则进一步升高(分别为3.6±1.5和1.71±0.23),P<0.05和P<0.01.结论:外源性炎症因子TNF-α能够诱导心脏E3泛素连接酶MuRF-1表达,在心肌损伤中起了重要作用.
