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补气活血通络法对神经吻合术后大鼠神经及腓肠肌蛋白表达的影响
目的 研究补气活血通络法对大鼠坐骨神经吻合术后神经功能及腓肠肌内蛋白表达的影响.方法 采用SPF级SD大鼠,雌雄各半,随机分为假手术组、生理盐水组.甲钴胺片组以及补阳还五汤组4组.分别在造模给药后2,4个疗程(每个疗程15d)进行大体观察、电生理观察以及采用Western Bloting法检测FoxO3a和MAFbx的蛋白表达.结果 给药4个疗程时补阳还五汤组大鼠肢体功能改善明显好于生理盐水组和甲钴胺片组;神经电生理检测坐骨神经传导速度,神经吻合术后各组均明显差于假手术组,4个疗程时补阳还五汤组和甲钴胺片组神经传导速度均优于相应组别的2个疗程时传导速度;腓肠肌细胞内FoxO3a和MAFbx蛋白的表达在相同的疗程补阳还五汤组和甲钴胺片组明显低于生理盐水组,补阳还五汤组FoxO3a和MAFbx蛋白表达低于甲钴胺片组.结论 采用补气活血通络法可明显促进大鼠神经吻合术后功能障碍的恢复,促进神经的修复以及抑制FoxO3a和MAFbx蛋白的表达.
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保元解毒汤对癌性恶病质小鼠骨骼肌蛋白质降解及MAFbx、 MuRF-1基因表达的影响
目的 研究保元解毒汤对肺癌恶病质小鼠骨骼肌蛋白质降解及MAFbx、MuRF-1基因表达的影响,探讨其干预骨骼肌蛋白质代谢的可能机制.方法 C57BL/6小鼠皮下接种Lewis肺癌细胞株复制肺癌恶病质小鼠模型.40只小鼠随机分为正常对照组、模型组、保元解毒汤组和醋酸甲羟孕酮组.测定小鼠腓肠肌质量;高效液相色谱法检测腓肠肌3-甲基组氨酸(3-MH)含量;RT-PCR法测定腓肠肌MAFbx、MuRF-1mRNA表达.结果 与正常对照组比较,模型组小鼠腓肠肌质量显著降低(P＜0.05),肌组织内3-MH含量明显升高(P＜0.05),MAFbx、MuRF-1 mRNA表达显著升高(P＜0.05);与模型组和醋酸甲羟孕酮组比较,保元解毒汤组小鼠腓肠肌质量显著增加(P＜0.05),肌组织内3-MH含量明显降低(P＜0.05),MAFbx、MuRF-1 mRNA表达显著降低(P＜0.05).结论 保元解毒汤能够改善癌性恶病质小鼠骨骼肌萎缩,其机制可能与MAFbx、MuRF-1基因表达下调,骨骼肌收缩蛋白降解减少相关.
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胃癌细胞中SerpinB5与MAFbx的相互作用及其作用位点研究
目的 探讨胃癌细胞中SerpinB5能与MAFbx的相互作用及其作用位点.方法 采用酵母双杂交及免疫共沉淀方法检测SerpinB5与MAFbx之间的相互作用.分别用RNA干扰及瞬间转染pGBKT7-SerpinB5调节SerpinB5表达水平.在胃癌细胞株SUN-16中研究SerpinB5对MAFbx表达的影响.用同源建模的方法构建出MAFbx的结构信息;并以分子对接的手段来预测SerpinB5与MAFbx相互作用的位点.结果 酵母双杂交及免疫共沉淀均证实SerpinB5能与MAFbx相互作用；MAFbx的表达水平随着SerpinB5的表达水平变化而变化.同源建模和分子对接的方法预测SerpinB5与MAFbx蛋白相互作用的关键残基是PR0261、ASN361和LYS362.结论 胃癌细胞中SerpinB5能与MAFbx相互作用,且SerpinB5上的PR0261、ASN361、LYS362残基是其与MAFbx蛋白相互作用的可能位点.
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AMPK对心肌细胞FOXO3a转录因子活性以及泛素连接酶MAFbx表达的影响
[目的]研究5-氨基-4甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)对心肌细胞转录因子FOXO3a的活性以及泛素连接酶MAFbx蛋白表达的影响,探讨AMP激活的蛋白激酶(AMPK)在心肌细胞蛋白质降解中所起的作用.[方法]用不同浓度AICAR干预培养的新生大鼠心肌细胞6 h,观察AICAR对心肌细胞AMPK的激活作用.再将培养的心肌细胞分成3组:对照组,AICAR组,AICAR+Compound C组.用Western blot检测AMPK激活对心肌细胞FOXO3a转录因子活性,以及MAFbx蛋白表达的影响.[结果]①与对照组比较,0.25mmol/L与0.5mmol/LAICAR处理6 h后心肌细胞AMPK活性升高(P＜0.05),而1.0 mmol/L与2.0 mmol/L AICAR组AMPK活性增加更明显(P＜0.01).②与对照组比较,AICAR激活AMPK后显著增加FOXO3a转录活性(P＜0.01),促进MAFbx蛋白表达(P＜0.01),而特异性的AMPK抑制剂Compound C则明显抑制了该作用.[结论]AMPK可能通过激活心肌细胞FOXO3a的转录活性,上调MAFbx蛋白表达,参与心肌细胞蛋白质降解的调控.
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川芎嗪对失神经骨骼肌萎缩大鼠FoXO3a、MAFbx以及MuRF1表达的影响
目的 研究川芎嗪对失神经骨骼肌萎缩中FoXO3a、MAFbx及MuRF1表达的影响.方法 8周龄雌性SD大鼠54只,体重(200±10)g.随机分为3组,即正常对照组(A组,n=6)、失神经对照组(B组,n=24)、干预组(C组,n=24).B、C组实验动物制备右下肢失神经腓肠肌动物模型,C组于模型制备后每日腹腔注射川芎嗪注射液80 mg/(kg·d),B组每日腹腔注射等剂量生理盐水;A组实验动物不作任何处理.取A组实验动物以及造模后2、7、14、28dB、C组实验动物各6只,处死取其双侧腓肠肌称湿重,计算腓肠肌肌湿重比;另取右侧肌组织采用RT-PCR及Western blot检测各时间点FoXO3a、MAFbx、MuRF1mRNA和蛋白表达水平.结果 与A组比较,随着大鼠失神经时间延长,B、C组腓肠肌肌湿重比逐渐下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);造模后7、14、28 d,C组腓肠肌肌湿重比高于B组,且差异有统计学意义(P＜0.05).B、C组造模后7、14、28 d,FoXO3a、MAFbx、MuRF1mRNA和蛋白表达水平均较A组高,C组各时间点均较B组降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 川芎嗪可能通过降低FoXO3a、MAFbx以及MuRF1mRNA和蛋白表达水平进而延缓失神经骨骼肌萎缩.
