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Ⅳ型糖原累积病5例临床和基因分析
目的 探讨糖原累积病IV型(GSD IV)的临床、实验室检查及基因突变特点.方法 分析5例GSD IV患儿的临床表现、生化指标、壳三糖酶活性及治疗随访情况.结果 患儿男3例、女2例,于4个月~5岁2个月因肝脾肿大及肝功能异常就诊.2例伴运动发育落后和肌无力,但肌酸激酶水平正常;4例肝脏活检示肝糖原沉积和不同程度肝纤维化.靶向测序发现5例患儿均携带GBE1基因复合杂合突变,共发现2种已报道突变(p.R 515 C,p.R 524 Q)和7种新突变,新突变包含5种错义突变(p.I 460 T、p.F 76 S、p.F 538 V、p.L 650 R、p.W 455 R),1种插入突变(c.141_142 insGCGC)及1种大片段缺失(外显子3-7),确诊为肝型GSD IV型.2例因肝硬化死亡;1例因肝硬化行亲体肝移植,移植前血壳三糖酶活性显著升高而移植后明显下降,移植后4个月肝酶恢复正常;另2例生长发育和肝功能基本正常,1例未行特殊治疗,1例服用生玉米淀粉,其血壳三糖酶活性正常. 结论 GSD IV的临床表现异质性大,靶向测序可快速明确诊断,壳三糖酶有助于判断预后.
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河南省健康人群中壳三糖酶基因型分布
目的:研究河南省健康人群中壳三糖酶不同基因型的分布情况.方法:随机抽取107例健康献血员为研究对象,采取多聚酶链反应技术(PCR)扩增其基因组DNA,进行壳三糖酶基因型分析.结果:107例健康人中,HH纯合子突变基因型29例(27%),TT正常基因型52例(49%),HT杂合子携带者基因型26例(24%).H、T等位基因频率分别为0.393、0.607.结论:河南省健康人群的壳三糖酶基因型分布不符合Hardy-Weinberg平衡定律.本研究结果为进一步研究壳三糖酶基因型与疾病的关系提供了基础数据.
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早产儿和足月儿母亲母乳中壳三糖酶的比较
目的：测量不同时期母乳中壳三糖酶的活性，确定在早产儿和足月儿母亲的母乳中壳三糖酶的活性是否不同，以探讨其在帮助早产儿抵御真菌感染中的作用。方法哺乳期妇女分早产和足月两个组分别在产后第3、7、28天取初乳、过渡乳、成熟乳的3份标本，用荧光法测定壳三糖酶活性。结果母乳中的壳三糖酶活性随时间逐渐下降，早产组母乳中的壳三糖酶活性在第3、7、28天均高于足月组。结论壳三糖酶在防御真菌感染中有重要作用。母乳中高水平的壳三糖酶为早产儿抵御真菌感染提供了天然的帮助，应大力鼓励母乳喂养，特别是初乳。
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人壳三糖酶基因在巴氏毕赤酵母中的真核表达和纯化
目的 用巴斯德毕赤酵母系统表达人壳三糖酶,并进行亲和层析纯化,获得具有天然构象的人壳三糖酶.方法 从pUC19-Chit融合载体中扩增编码人壳三糖酶基因,并将其克隆入真核表达载体pPIC9K,以电穿孔法转化酵母GS115.用MD平板筛选重组子,G418筛选高拷贝转化子,经甲醇诱导表达后,几丁质亲和层析法对表达上清进行纯化,并进行SDS-PAGE分析.结果 构建了人壳三糖酶融合真核表达载体pPIC9K-Chit.SDS-PAGE显示人壳三糖酶分子量约为50 000 Da,表达量约为24 mg/L,纯度为97%.结论 人壳三糖酶在毕赤酵母中的成功表达和具有天然构象的人壳三糖酶获得为进一步研究其抗真菌作用提供了物质基础.
