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LncRNA ANCR调控miR-331表达影响胃癌细胞的生物学行为
背景与目的:胃癌是导致癌症死亡的第二大原因,是东亚、东欧及中南美洲部分地区常见的胃肠道恶性肿瘤.该研究旨在探讨长链非编码RNA(long-chain noncoding RNA,lncRNA)抗分化非编码RNA(antidifferentiation noncoding RNA,ANCR)靶向miR-331调节胃癌细胞的增殖、侵袭行为及其机制.方法:河南省肿瘤医院2016年1月1日—2016年12月1日获得60例临床胃癌样本和20例对应的癌旁组织标本(距癌组织2 cm).实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测ANCR在胃癌组织和不同胃癌细胞株中的表达情况;分析ANCR的表达和胃癌患者临床病理学特征之间的关系;平板克隆实验检测ANCR对胃癌细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测ANCR对胃癌细胞侵袭能力的影响;裸鼠成瘤实验检测ANCR对胃癌细胞肿瘤异种移植的影响;双荧光素酶报告基因检测ANCR与miR-331之间的相互作用.结果:胃癌组织中ANCR的表达(4.18±0.28)高于正常组织(1.45±0.15),差异有统计学意义(t=12.36,P=0.045);与其他胃癌细胞株相比,BGC-823和MGC-803细胞中ANCR的表达水平较高(9.12±0.52),差异有统计学意义(P=0.019);抑制ANCR的表达可以减弱胃癌细胞的增殖能力(98.8±10.4)和侵袭能力(175.9±5.7);抑制ANCR的表达后胃癌细胞在裸鼠体内异种移植能力(223.4±13.4)弱于NC组(115.6±10.7),差异有统计学意义(t=13.28,P=0.014);双荧光素酶实验证实ANCR可以直接调控miR-331的表达及荧光活性.结论:ANCR可以靶向调节miR-331的表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭行为,影响胃癌细胞在裸鼠体内的生长情况.
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胃癌患者血清外泌体中DANCR表达及其临床意义
目的 检测胃癌患者血清外泌体(exosome)中抗分化非编码RNA(DANCR)的表达水平并分析其临床应用价值.方法 采用实时荧光定量RT-PCR检测胃癌细胞培养上清和胃癌患者血清exosome中DANCR表达水平,分析其与临床病理资料的相关性,绘制ROC曲线评价其诊断效能.结果 DANCR在人胃癌细胞系HGC-27中表达水平(4.43±0.37)明显高于胃黏膜上皮细胞(1.01±0.01),差异有统计学意义(P＜0.05).HGC-27细胞培养上清exosome中DANCR表达水平(3.06±0.14)明显高于GES-1细胞(1.01±0.20),差异有统计学意义(P＜0.05).DANCR在胃癌患者血清exosome中的平均含量[5.060(1.380,22.785)]较胃良性疾病患者[0.535 (0.340,1.380)]和体检健康者[1.200(0.605,1.655)]明显升高(Z分别为-3.409,-4.229,P均＜0.01),且与肿瘤大小、TNM分期以及淋巴结转移相关.胃良性疾病患者与体检健康者相比,血清exosome中DANCR含量差异无统计学意义(Z=-1.308,P＞0.05).胃癌患者血清exosome中DANCR的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.777,95％可信区间(CI)为0.678～0.876,cut-off值2.50,敏感性为68.6％,特异性为84.4％.结论 胃癌患者血清exosome中DANCR表达水平升高,有望成为胃癌诊断的新指标.
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LncRNA-ANCR介导的组蛋白甲基化酶EZH2对结直肠癌侵袭与转移的调控
目的 探讨lncRNA-ANCR与组蛋白甲基转移酶EZH2的表达及其与结直肠癌细胞侵袭与转移的关系.方法 培养结肠癌SW620细胞系,转染ANCR-siRNA至细胞,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测ANCR和EZH2表达,Western blot检测EZH2蛋白表达水平,采用RNA pull-down和免疫共沉淀的方法检测ANCR与EZH2的相互作用关系,Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和转移能力.结果 结肠癌SW620细胞中ANCR和EZH2的表达均显著高于正常结肠上皮细胞(P<0.05).转染ANCR-siRNA的SW620细胞中ANCR的表达较转染阴性对照质粒的SW620细胞显著降低,且EZH2的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).RNA pull-down与免疫共沉淀的结果显示ANCR可与EZH2特异性结合.而Transwell实验和划痕实验显示转染ANCR-siRNA的SW620细胞的侵袭和迁移能力均显著低于转染阴性对照质粒的SW620细胞(P<0.05).结论 结直肠癌细胞中ANCR与EZH2的表达均上调,ANCR可能通过特异性结合EZH2调节结直肠癌细胞的侵袭和转移.
