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异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS生长的影响
背景与目的：骨肉瘤恶性程度高、发展迅速、易转移且致残致死率高；其常用化疗药物的长期应用不良反应较大，存在着一定的局限性。异甜菊醇具有四环二萜结构，是很多抗癌药的合成起始剂，但其自身的抗癌活性鲜有报道。该研究旨在考察异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS生长的影响，并初步探讨其作用机制。方法：通过MTT实验检测异甜菊醇对U-2OS细胞生长的影响；分别通过Hoechst 33342和PI染色分析细胞状态，检测细胞活性氧和细胞膜电位；用流式细胞术分析异甜菊醇处理细胞后细胞周期；通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的差异表达。结果：异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS的抑制呈现出时间和剂量依赖性；染色和流式细胞术实验显示，异甜菊醇对骨肉瘤细胞U-2OS作用24 h观察到细胞S期周期阻滞，48 h时观察到细胞凋亡；随着药物浓度升高活性氧显著增多，细胞膜电位逐渐降低，促凋亡相关蛋白Bax的表达上调，抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达下调。结论：异甜菊醇对人骨肉瘤U-2OS细胞有抑制生长作用，其作用机制可能与上调Bax及下调Bcl-2等凋亡相关蛋白的表达有关。
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U-2OS中抑癌基因pitx1突变的鉴定及分析
目的 克隆人骨肉瘤细胞U-2OS中抑癌基因pitx1,进行测序,并检测pitx1下游基因p53的表达情况.方法 采用RT-PCR法扩增U-2OS中Pitx1基因,并进行克隆测序;采用定量PCR和western blot方法 检测pitx1下游基因p53的RNA和蛋白水平表达情况.结果 在U-2OS中抑癌基因pitx1发生突变,其下游基因p53的相对表达量显著低于pitx1野生型细胞株HOS.结论 pitx1 属于重要的抑癌基因p53及原癌基因ras的上游调控因子,在pitx1中的突变可能导致了该细胞株的恶变及化疗耐药.
