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锌指结构蛋白148可变剪切体在结直肠癌发生发展中的作用
目的:探讨锌指结构蛋白148(zinc finger protein 148,ZNF 148)基因的两种可变剪接体对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响及相关作用机制.方法:RT-PCR检测人结肠癌SW480细胞中的ZNF 148两种剪接体的表达,构建ZNF148干扰载体和过表达载体,将构建成功的ZNF148干扰载体及过表达载体转染至人结肠癌SW480细胞中,分为ZNF 148FL-siRNA组、ZNF148FL-Over express组、ZNF 148△N-siRNA组、ZNF148△N-Over express组、Control siRNA组、Control Over express组以及Normal control组.RTPCR检测各组细胞mRNA表达水平,MTT、Transwell、划痕实验和流式细胞术检测人结肠癌SW480细胞的增殖、体外细胞侵袭、迁移和凋亡情况.结果:RT-PCR扩增获得全长分别为2 385 bp以及2 004 bp的ZNF148FL与ZNF148△N两种不同剪接体产物.ZNF 148FL-siRNA组ZNF 148FL的表达量明显下降,但ZNF148△N的表达水平上升;ZNF148FL-Over express组ZNF148FL的表达量明显上升,而ZNF148△N的表达水平下降(均P＜0.05).ZNF148△N-siRNA组的ZNF148△N表达水平明显下降,但ZNF148FL的表达水平上升;ZNF148AN-Over express组ZNF148△N表达水平升高,而ZNF148FL的表达水平下降(均P＜0.05).ZNF148FL-Over express组及ZNF 148 △N-siRNA组SW480细胞增殖能力增强,而ZNF148FLsiRNA组和ZNF 148△N-Over express组SW480细胞增殖能力下降(均P＜0.05).ZNF 148FL-siRNA组和ZNF148△N-Over express组穿膜SW480细胞数量及迁移活性显著下降,而凋亡率显著上调;ZNF148FL-Over express组和ZNF 148△N-siRNA组穿膜细胞数及迁移活性显著上调,而凋亡率显著下调(均P＜0.05).结论:ZNF148FL表现为增加结直肠癌细胞的增殖、侵袭和转移活力,而ZNF△N作用与之相反,ZNF148的ZNF148FL与ZNF△N两种剪接体对于结直肠癌的恶性生物活性可能表现出了互相拮抗作用.
