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桥接整合因子1通过AKT-mTOR通路诱导非小细胞肺癌H1975细胞周期阻滞
目的:研究桥接整合因子1(bridging intergrator 1,Bin1)基因过表达后对非小细胞肺癌细胞株H1975细胞周期的影响及其作用机制.方法:构建携带Bin1基因的CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin-Bin1质粒,并转染H1975细胞(Bin1+组),另设置空白质粒转染组(Bin1-组)及空白对照组(Ctrl组),利用RT-PCR和Western blotting分别检测3组细胞中Bin1在mRNA和蛋白质水平的表达情况.流式细胞术检测不同处理组H1975细胞周期的变化,Western bohting分别检测各组中AKT、mTOR磷酸化水平及细胞周期相关蛋白(周期蛋白D1、CDK4、Rb)的表达情况.结果:与Bin1-组、Ctrl组比较,Bin1+组H1975细胞中Bin1在mRNA、蛋白水平表达明显上调(均P＜0.05);H1975细胞阻滞在G1期[(60.53±1.89)％vs(46.14±1.56)％、(47.33±2.07)％,均P＜0.05];Bin1+组H1975细胞内p-AKT、p-mTOR表达下调(均P＜0.05),AKT、mTOR表达变化无统计学差异(P＞0.05);周期蛋白D1、CDK4的表达量均明显下调(P＜0.05),Rb表达量明显增加(P＜0.05).结论:Bin1基因在H1975细胞株过表达后明显诱导细胞周期阻滞,其机制可能是通过抑制AKT-mTOR通路及其细胞周期相关蛋白实现的.
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黄芪甲苷通过AKT-mTOR信号通路促进脑缺血的自噬改善脑缺血再灌注损伤
目的 研究黄芪甲苷对脑缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用.方法 将72只健康SD大鼠随机分成假手术组、I/R组、雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量(20 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100 mg·kg-1)组.除假手术组外,各组分别采用大脑中动脉闭塞法建立大鼠I/R模型.观察脑梗死面积、细胞形态,免疫组化及Western blot检测海马神经元凋亡和自噬水平.结果 I/R组、雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组Bederson评分与假手术组比较,均有差异有统计学意义(P<0.05);雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组Bederson评分均低于I/R组(P<0.05).雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组大鼠的脑梗死面积明显小于I/R组.雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组的海马凋亡阳性细胞数减少、凋亡率降低(P<0.05).与I/R组比较,雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组的神经细胞核双层膜结构尚完整,细胞器结构破坏较少.I/R组、雷帕霉素和黄芪甲苷不同剂量组与假手术组比较,caspase-3和P62水平均升高,Bcl-2、LC3Ⅱ、Beclinl、ATG5和LAMP2蛋白相对表达量均降低;I/R组与雷帕霉素组和黄芪甲苷不同剂量组比较,caspase-3和P62水平显著升高(P<0.05),Bcl-2、LC3Ⅱ、Beclinl、ATG5和LAMP2蛋白相对表达量均降低.结论 黄芪甲苷可减轻细胞结构损伤,减少脑梗死面积,减轻细胞坏死及凋亡,增加自噬水平,降低凋亡水平.黄芪甲苷通过AKT-mTOR信号通路促进脑缺血的自噬改善脑I/R损伤.
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七氟醚预处理对PTSD大鼠行为学及海马Akt-mTOR信号通路的影响
目的 探讨七氟醚预处理对创伤后应激障碍(PTSD)大鼠行为学及海马Akt-mTOR信号通路的影响.方法 将雄性SD大鼠108只,随机分为:正常对照组(C组,n=10),侧脑室置管组(T组,n=10),PTSD模型组(P组,n=22),七氟醚组(S组,n=22),胰岛素生长因子-1组(Ⅰ组,n=22)和胰岛素生长因子-1联合七氟醚组(IS组,n=22).采用单一连续应激(SPS)方案建立PTSD大鼠模型.T组侧脑室注射生理盐水5 μl;P组侧脑室注射生理盐水5μl后,SPS造模；S组侧脑室注射生理盐水5μl后,吸入七氟醚2h,然后SPS造模；Ⅰ组侧脑室注射胰岛素生长因子-1 5μl(0.4μg/μl)后,SPS造模；IS组侧脑室注射胰岛素生长因子-1 5μl(0.4μg/μl)后,吸入2％七氟醚2h,然后SPS造模.在造模成功后30 min、1、2和4h,每组取4只大鼠处死提取海马组织,Western Blot检测海马Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达量；造模后第7天,每组6只,分别行旷场实验和木僵率测试.结果 与C组和T组比较,P组、S组、Ⅰ组和IS组中央格停留时间明显缩短、直立次数明显减少、木僵率、造模后1 hp-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR表达量明显升高(P＜0.05).与P组和Ⅰ组比较,S组和IS组中央格停留时间明显延长、直立次数明显增加、木僵率明显降低(P＜0.05).与P组比较,S组造模后1 h p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR表达量明显降低(P＜0.05)；而Ⅰ组和IS组p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR表达量明显升高(P＜0.05).与Ⅰ组比较,IS组木僵率、造模后1hS组、IS组p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR表达量明显降低(P＜0.05).与造模后30 min比较,造模后1hP组的p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR表达量明显升高(P＜0.05).结论 七氟醚可以改善PTSD模型大鼠术后7d的焦虑水平和木僵行为,其效应可能与其抑制PTSD大鼠海马Akt和mTO R的磷酸化有关.
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骨化三醇、雷帕霉素及其联合使用对人子宫内膜癌Ishikawa细胞株的作用及机制研究
目的 观察骨化三醇、雷帕霉素及其联合使用对人子宫内膜癌Ishikawa细胞抑癌作用及其可能的作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度的骨化三醇、雷帕霉素对人子宫内膜癌细胞株Ishikawa抑制率的影响;用倒置显微镜观察细胞形态学改变;流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化;RT-PCR检测Akt、mTOR mRNA的表达;Western blot检测Akt、mTOR蛋白的表达.结果 10-7 mol·L-1骨化三醇组和50.0 nmol·L-1的雷帕霉素与人子宫内膜癌Ishikawa细胞株共培养48 h为二者抑癌效应适宜浓度和时间点.联合用药组对细胞的增殖抑制率均高于单独应用骨化三醇、雷帕霉素组,而Akt/mTOR信号物质表达量均明显降低(P<0.05).结论 骨化三醇联合雷帕霉素可协同抑制人子宫内膜癌细胞株Ishikawa的增殖,其机制可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,从而发挥抑制子宫内膜癌增殖的作用.
