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口服型VEGFR-2 DNA疫苗的研制及其对小鼠的免疫效应
目的:血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial factor recepto-2,VEGFR-2)在肿瘤生长和转移过程中起着重要作用,制备口服型VEGFR-2 DNA疫苗并研究其生物免疫效应.方法:采用基因重组技术构建VEGFR-2胞外区基因表达载体pcDNA3.1-VR-2, DNA序列分析证实后,脂质体法转染COS-7细胞, Western blotting检测其VEGFR蛋白表达;以氯化钙法将pcDNA3.1-VR-2转化减毒沙门菌SL3261,制备口服型VEGFR-2 DNA疫苗.口服型疫苗免疫C57BL/6小鼠,ELISA法检测免疫后小鼠外周血VEGFR-2抗体水平,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞对小鼠血管内皮细胞的体外杀伤活性.结果:成功制备口服型VEGFR-2 DNA疫苗.ELISA法检测显示,疫苗组小鼠抗体滴度随着免疫时间和免疫次数的增加而增高,在免疫6周后产生了高水平抗VEGFR-2 IgG类抗体(1.07±0.018),明显高于生理盐水组(0.14±0.033)和质粒对照组(0.14±0.038),差异均有统计学意义(F=853.17,P=0.000).MTT法检测显示,疫苗组小鼠脾淋巴细胞对靶细胞MS1的杀伤率随着效靶比的增加而增加,在效靶比8∶1时CTL活性(89.38±1.51)明显高于生理盐水组(15.17±2.54)和空质粒对照组(12.99±4.31),差异有统计学意义(F=315.42,P=0.000).结论:成功制备了口服型VEGFR-2 DNA疫苗,该疫苗可激活小鼠特异性的细胞免疫和体液免疫,为进一步抗肿瘤研究奠定了基础.
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非小细胞肺癌VEGFR-2与XAGE-1b基因表达相关性研究
目的 探讨非小细胞肺癌中血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)与肿瘤-睾丸抗原XAGE-1b基因表达的相关性.方法 从30例非小细胞肺癌患者肿瘤组织中提取总RNA、RT-PCR反应扩增XAGE-1b基因、定量RT-PCR检测VEGFR-2表达水平.分析二者表达的相关性以及与临床特征的相关性.结果 30例患者中,XAGE-1 b表达阳性率为40％,61.1％的腺癌表达XAGE-1b,远高于非腺癌的8.3％ (x2=6.302,P=0.012).XAGE-1b与VEGFR-2表达水平呈正相关(r=0.546,P=0.002),XAGE-1b阳性患者的VEGFR-2表达水平偏高.多元回归分析显示,病理类型(比值比0.072,95％可信区间0.007～0.785,P=0.031)和VEGFR-2表达水平(比值比14.765,95％可信区间 1.274～171.144,P=0.031)是XAGE-1b表达的影响因素.XAGE-1b表达阳性与阴性、VEGFR-2表达高与低患者的生存时间差异均无统计学意义( Log-rankP=0.416、P=0.384).结论 非小细胞肺癌中VEGFR-2与XAGE-1b基因表达呈正相关,XAGE-1b表达阳性并且VEGFR-2高表达的患者可能是免疫疗法与抗血管生成疗法联合治疗的合适人群.
