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Survivin基因特异性siRNA腺病毒介导的肿瘤放射增敏作用
目的:构建携带沉寂Survivin基因表达特异性siRNA的重组腺病毒载体,观察其在荷瘤动物体内对Survivin基因的表达以及对瘤细胞放射敏感性的影响.方法: 设计合成针对Survivin基因序列的siRNA,构建并重组腺病毒AdEGFP-siRNA.建立裸鼠SMMC 7721肝癌移植瘤模型,分5组进行实验,siRNA+放疗组和siRNA组以AdEGFP-siRNA瘤内多点注射,siRNA(-)组以AdEGFP-siRNA(-)瘤内多点注射,隔日1次,每次2×108 pfu/100 μl,共5次;单纯放疗组和空白对照组以等量生理盐水代替病毒注射;于第10、12、14、16天siRNA+放疗组和单纯放疗组给予5 Gy/次的照射;定时测量瘤体体积;观察周期结束,取瘤组织免疫组化检测Survivin蛋白的表达.结果: 成功构建并重组表达Survivin基因特异性siRNA序列和绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的腺病毒AdEGFP-siRNA.裸鼠SMMC 7721移植瘤在注射AdEGFP-siRNA后生长受到明显抑制,抑瘤率为56.2%;AdEGFP-siRNA病毒治疗和放疗结合,可将抑瘤率提高到82.6%.移植瘤组织免疫组化检查显示,特异性siRNA显著降低了肝癌细胞Survivin的表达.结论: Survivin特异性siRNA能够沉寂其基因的表达和抑制肿瘤的生长,同时可以提高肿瘤细胞的放射敏感性,改善治疗效果.
关键词： Survivin基因 腺病毒 RNA干扰 放射治疗敏感性 肿瘤治疗 -
大蒜素对皮肤基底细胞癌细胞放射治疗敏感性的影响及其与自噬水平的关系
目的 探讨大蒜素(Allicin)对皮肤基底细胞癌细胞放射治疗敏感性的影响及其与自噬水平的关系.方法 采用MTT法检测Allicin对A431细胞的生长抑制作用,记录半数抑制浓度(IC50);将细胞分为4组:照射组(IR组)、Allicin组、IR+ Allicin组以及对照组.细胞自噬水平的检测采用流式细胞仪.结果 MTT检测结果显示,A431细胞经Allicin处理24,48,72h后,其活性受到显著的抑制,抑制程度受到时间及浓度的影响.同一浓度下,不同时间比较以及同一时间内不同浓度的比较,A431细胞活性的差异均具有统计学意义(P均＜0.05).Allicin作用于A431细胞24,48,72h的IC50分别为34.14,17.78,6.72mmol/L,差异均具有统计学意义(P均＜0.05).IR+ Allicin组的SF2,D0,D.分别为:75.81,6.46,1.34;IR组的SF2,D0,D.分别为96.21,8.60,2.85.在各照射剂量点A431细胞的SF均显著低于IR组.与IR组比较,IR+ Allicin组的肩区逐渐缩小,说明细胞的损伤修复能力呈现降低趋势.Allicin 组和IR+ Allicin组的A431细胞自噬水平均高于对照组,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 Allicin能上调人皮肤基底细胞癌A431细胞的自噬水平,进而增加A431细胞的放疗敏感性.
