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siRNA沉默FOXM1基因表达对人鼻咽癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响
目的:研究特异性siRNA沉默转录因子叉头框M1 (forkhead box M1,FOXM1)基因表达对人鼻咽癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响,并探讨其相关的分子机制.方法:将特异性靶向FOXM1基因的siRNA(FOXM1-siRNA)转染至鼻咽癌5-8F细胞后,采用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测FOXM1基因表达沉默效果.然后采用MTT法、FCM法、Annexin V-FITC/PI双染法和蛋白质印迹法分别检测OXM1基因表达沉默后鼻咽癌细胞增殖、周期分布、凋亡和紫杉醇敏感性的变化,以及相关蛋白的表达.结果:FOXM1-siRNA转染后5-8F细胞中FOXM1 mRNA及蛋白的表达水平明显降低(P值均＜ 0.01).FOXM1基因表达沉默后,5-8F细胞的增殖活性明显降低(P＜0.05),增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达水平明显降低(P＜0.01);同时,G1期细胞所占比例明显升高(P＜0.01),S期细胞所占比例降低(P＜0.05),CyclinD1表达下调(P＜0.01);细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),Bcl-2表达下调(P＜0.01),Bax表达上调(P＜0.01);细胞对紫杉醇的敏感性明显增强(P＜0.01),多药耐药相关蛋白1 (multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)表达水平降低(P＜0.01).结论:特异性siRNA沉默FOXM1基因表达可抑制鼻咽癌5-8F细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并提高细胞对紫杉醇的敏感性;其机制可能与下调PCNA、Cyclin D1、MRP1和Bcl-2表达,以及上调Bax表达有关.
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ER阳性乳腺癌中FOXM1和GRP78蛋白表达与临床病理因素及预后的相关性研究
目的:检测ER阳性乳腺癌组织中叉头框M1(forkhead boxM1,FOXM1)及葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein of 78kDa,GRP78)的表达水平,探讨其与临床各参数及预后的关系.方法:应用免疫组化技术检测FOXM1、GRP78在60例ER阳性乳腺癌中的表达,分析两者表达量的相关性,与临床病理参数的相关性及其对患者预后的影响.结果:FOXM1和GRP78在ER阳性乳腺癌癌组织中高表达,两者的表达呈正相关性;患者的无复发生存期(recurrence-free survival,RFS)与脉管侵犯、FOXM1、GRP78、Ki67表达、HER2表达有关,GRP78和FOXM1高表达均是ER阳性乳腺癌患者RFS的影响因素.结论:通过本研究发现FOXM1和GRP78在ER阳性乳腺癌癌组织中高表达,两者均影响ER阳性乳腺癌患者5年RFS时间.
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USP22、FoxM1在结直肠癌中的表达研究
目的 探讨去泛素酶基因(USP22)和叉头框M1基因(FoxM1)表达在结直肠癌发生、发展中的作用,以及与患者临床病理特征的关系.方法 选取行手术切除的结直肠癌组织标本120例和正常结直肠黏膜组织标本32例;采用免疫组织化学EnVision二步法和Western blot检测结直肠癌组织及相应癌旁正常组织中USP22、FoxM1及Wnt/β-catenin通路相关蛋白(β-catenin、LEF/TCF、c-myc)的表达.结果 结直肠癌组织中USP22、FoxM1的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(均P＜0.05).结直肠癌组织中USP22、FoxM1、β-catenin、LEF/TCF、c-myc蛋白的表达水平均明显高于癌旁正常组织(均P＜0.05).结直肠癌组织中USP22、FoxM1表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移、肝脏转移及Duke's分期均有关(均P＜0.05);且USP22/FoxM1共表达与肿瘤淋巴结转移、肝脏转移及Duke's分期亦均有关(均P＜0.05).结论 结直肠癌组织中USP22、FoxM1的异常高表达可能参与了结直肠癌的发生、发展过程,且两者具有协同作用.
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叉头框M1在结直肠癌中的表达及临床意义
目的 探讨叉头框M1(FOXM1)在结直肠癌中的表达及与临床病理特征、预后的关系.方法 采用免疫组化SP法检测297例结直肠癌组织和80例对应癌旁正常组织中FOXM1的表达;Westem blot法检测20例新鲜结直肠癌组织及对应癌旁组织中FOXM1的表达.结果 FOXM1在结直肠癌组织中的阳性率(70.97％)显著高于癌旁组织(17.50％,P＜0.01);FOXM1表达与结直肠癌浸润深度、淋巴结转移、脉管内癌栓转移、远处转移和TNM分期有关(P＜0.05);与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、分化程度、CEA、CA199等无关(P＞0.05).结直肠癌组织中FOXM1蛋白相对表达量(0.855 ±0.063)明显高于相应癌旁组织(0.150 ±0.041,P＜0.01).FOXM1阳性患者的3年生存率明显低于阴性患者(P＜0.01),且FOXM1为结直肠癌预后的独立性危险因素.结论 FOXM1蛋白在结直肠癌组织中过表达,且与患者临床病理特征、预后等因素有关,可能在结直肠癌的发生、转移等过程中起重要作用,有望成为结直肠癌新的肿瘤标志物和潜在的治疗靶点.
关键词： 结直肠肿瘤 叉头框M1 免疫组织化学 Western blot法 预后 -
硫链丝菌肽抑制FoxM1表达后对鼻咽癌细胞凋亡的影响及机制探讨
目的:探讨硫链丝菌肽(thiostrepton,TST)抑制鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞CNE-2中叉头框M1 (fork-head box M1,FoxM1)表达后凋亡作用的增强及可能机制.方法:细胞培养传代后过夜培养,将细胞分为3组:对照组未加TST、只加0.1％二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的培养液,4μmol/L TST组,8μmol/L TST组,培养48 h后,进行不同的实验手段观察处理.显微镜下观察TST作用CNE-2后细胞形态学改变;Hoechst33342染色后显微镜下计数凋亡细胞个数,检测TST对CNE-2细胞凋亡的影响;流式细胞术检测TST作用CNE-2细胞后,细胞凋亡率的变化;Western blot检测TST作用CNE-2后细胞中FoxM1及凋亡相关蛋白的表达变化.结果:TST作用CNE-2细胞后细胞形态逐渐向凋亡发展,呈剂量依赖性;Hoechst33342染色检测凋亡结果显示各组凋亡细胞数为:对照组(0.1％ DMSO),4μmol/L TST组和8μmol/L TST组细胞凋亡数目分别为:0.60±0.55,3.60±0.89,7.00±1.58,TST对CNE-2细胞凋亡的影响呈剂量依赖性增加,对照组与TST组比较差别有统计学意义(F=42.72,P＜0.01);流式细胞术检测凋亡结果显示:对照组(0.1％ DMSO) (1.87±0.74)％;4μmol/L TST组(10.55±0.75)％;8 μmol/L TST组(19.35±2.49)％,随着TST浓度增加,CNE-2细胞凋亡率增加,对照组与TST组比较差别有统计学意义(F=94.50,P＜0.01);Western blot检测发现TST作用CNE-2后细胞中FoxM1蛋白表达下降,凋亡相关蛋白表达发生变化.结论:硫链丝菌肽在体外可以有效降低NPC CNE-2细胞中FoxM1表达,并抑制NPC CNE-2细胞生长,诱导其凋亡.
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人肝细胞癌中转录因子FoxM1表达与甲胎蛋白产生相关
目的:探讨人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中叉头框M1 (forkhead box M1,FoxM1)表达与甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)产生的关系.方法:分别采用Western blot和荧光定量PCR(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术检测52例HCC患者肝癌组织中FoxM1蛋白和AFP mRNA表达水平,并查询患者术前血清AFP水平,分析三者相关性;FoxM1特异性抑制剂硫链丝菌素(thiostrepton,TST)和重组FoxM1B腺病毒(adenovirus combined with FoxM1B gene,Ad-FoxM1B)分别作用人HepG2和HepG2.2.15肝癌细胞后,FQ-PCR检测FoxM1 mRNA表达变化,Western blot检测FoxM1蛋白表达变化,电化学发光法检测培养基上清AFP分泌变化.结果:(1)肝癌组织中FoxM1蛋白表达水平与组织中AFP mRNA表达水平及血清AFP分泌水平均呈正相关(r=0.448,P=0.001;r=0.381,P=0.005);(2)下调FoxM1表达可明显抑制HepG2和HepG2.2.15细胞分泌AFP(P1=0.000,P2=0.000);(3)FoxM1可明显促进HepG2和HepG2.2.15细胞表达和分泌AFP (P=0.000,P2=0.000;P1=0.001,P2=0.000).结论:人肝细胞癌中FoxM1与AFP的表达密切相关,FoxM1可能在促进AFP表达中发挥重要作用.
