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PTEN抑癌基因对人黏液表皮样癌细胞系增殖和细胞周期的影响
目的:探讨外源性PTEN抑癌基因对唾液腺黏液表皮样癌细胞系增殖抑制的机制.方法:将含野生型PTEN抑癌基因cDNA重组反转录病毒表达质粒导入高转移性唾液腺黏液表皮样癌细胞系M3SP2,转染空载体细胞为对照.MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞周期,免疫组化染色检测PCNA、EGFR、CDK4、P16INK4a和P57Kip2蛋白表达.采用SPSS11.0软件包进行统计学分析.结果:与对照细胞比较,PTEN基因转染癌细胞M3SP2-PTEN对表皮生长因子(EGF)介导的细胞增殖具有显著的抑制作用,癌细胞阻滞在G0/G1期,PCNA、ECFR、CDK4以及C-mye蛋白表达减弱,而P16INK4a和P57 Kip2蛋白表达增强(P<0.05).结论:外源性PTEN基因具有抑制唾液腺黏液表样癌皮细胞系EGF介导的增殖作用,其作用机制与细胞周期进程受阻以及细胞周期调控分子有关.
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PTEN基因联合多西环素对黏液表皮样癌细胞增殖的影响
目的:探讨PTEN抑癌基因联合多西环素(Dox)对黏液表皮样癌细胞系增殖的影响.方法:用脂质体将野生型PTEN基因导入人黏液表皮样癌细胞系,再用不同浓度的多西环素处理细胞,采用MTT比色法测定细胞存活,应用HE染色判定细胞形态,用流式细胞仪检测细胞周期,用免疫组化染色检测细胞PCNA和EGFR蛋白表达.结果:PTEN基因转染联合Dox组癌细胞增殖抑制显著,细胞出现空泡变性和凋亡,多数癌细胞阻滞于G1期,癌细胞中PCNA和EGFR蛋白的表达显著减弱,比PTEN基因转染或Dox单用作用更强.结论:PTEN抑癌基因联合多西环素对黏液表皮样癌细胞系增殖具有显著的协同抑制效应.
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外源性PTEN基因诱导黏液表皮样癌细胞系凋亡的研究
目的:探讨转染外源性PTEN抑癌基因对黏液表皮样癌细胞系M3SP2的诱导凋亡作用.方法:用含野生型PTEN抑癌基因逆转录病毒载体转染高转移性涎腺黏液表皮样癌细胞系M3SP2,转染空载体亲本细胞为对照细胞.体外细胞凋亡采用苏木精-伊红染色、电镜、TUNEL染色和流式细胞仪检测,裸鼠移植瘤细胞凋亡应用苏木精-伊红染色形态学判定.Bcl-2、P53和H-ras蛋白表达用免疫组化染色检测.结果:试验细胞M3SP2-PTEN与对照细胞M3SP2-pBp比较,出现较多的典型的凋亡细胞特征.试验细胞和对照细胞凋亡率分别为7.5%～13.6%和1.2%～2.3%;裸鼠移植瘤M3SP2-PTEN组和M3SP2-pBp组的凋亡指数分别为17.4%和3.5%.免疫组化染色显示M3SP2-PTEN细胞与对照细胞比较,P53蛋白表达增强,Bcl-2和H-ras蛋白表达减弱.结论:外源性PTEN抑癌基因能显著诱导高转移性涎腺黏液表皮样癌细胞凋亡,并且与P53、Bcl-2和H-ras蛋白表达有一定关系.
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靶向Survivin RNAi诱导人黏液表皮样癌细胞凋亡的实验研究
目的:应用RNA干扰技术靶向阻断Surviviii基因表达,探讨其对黏液表皮样癌细胞的诱导凋亡作用.方法:将RNA干扰表达载体Pgenesil-sur通过脂质体介导转染人黏液表皮样癌细胞,采用琼脂糖凝胶电泳检测"梯状条带";流式细胞仪检测细胞凋亡率和凋亡峰.结果:转染48h后琼脂糖凝胶电泳可见180-200bp凋亡带:对照组、空载体组未见凋亡带.流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示,靶向Survivin RNA干扰组24h、48h、72 h分别为26.32%、34.56%、32.41%;与转染空载体(1.26%、1.28%,1.27%)和空白对照组(1.22%、1.25%,1.24%)比较显著增高(P＜0.01);空载体组与空白对照组比较无统计学差异(P＞0.05).靶向SurvivinRNA干扰纽出现凋亡峰.结论:靶向Survivin RNA干扰能诱导体外培养的人黏液表皮样癌细胞发生凋亡.
关键词： RNA干扰 黏液表皮样癌细胞 Survivin基因 细胞凋亡 流式细胞术 -
重组人肿瘤坏死因子-α诱导黏液表皮样癌细胞凋亡
目的: 探讨重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)作用于人黏液表皮样癌细胞(MEC-1)的效应与机制. 方法: 应用细胞记数、DNA降解片段琼脂糖凝胶电泳观察、电镜观察和细胞周期测定rhTNF-α作用后MEC-1细胞的凋亡状况. 结果: rhTNF-α作用于MEC-1细胞后,导致细胞存活数目减少,大量细胞发生凋亡;基因组DNA分解成寡聚核苷酸片段,DNA琼脂糖凝胶电泳有梯形条带;细胞周期发生改变,形态学观察细胞核皱缩,染色质边集. 结论: rhTNF-α是通过MEC-1细胞发生凋亡而发挥细胞毒作用.
关键词： 重组人肿瘤坏死因子-α 凋亡 黏液表皮样癌细胞
