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柔红霉素C-14羟化酶基因在变铅青链霉菌TK24中的表达
将柔红霉素C-14羟化酶基因与酪氨酸酶基因启动子和红霉素抗性基因启动子串联连接,克隆到变铅青链霉菌TK24中进行表达.经过SDS-PAGE蛋白电泳、CO结合差光谱分析结果证明,重组克隆表达的羟化酶分子量约45kD、重组的蛋白量约占细胞总蛋白的12%,并具有细胞色素P-450的特征.
关键词: 柔红霉素C-14羟化酶基因 克隆和表达 变铅青链霉菌TK24 -
天蓝淡红链霉菌SIPI1482中柔红霉素C-14羟化酶基因的克隆和序列分析
根据GenBank中公布的两种柔红霉素C-14羟化酶基因(doxA)的序列,设计引物并通过PCR扩增方法从天蓝淡红链霉菌SIPI1482中扩增出约1.4kb的目的片段,其中包括了长度为1269bp的doxA全长序列,而同时从波赛链霉菌SIPI40141中没有扩增出基因片段.将扩增出的doxA基因和载体质粒pBlue-script KS连接后构建了质粒pYG510,通过PCR扩增、酶切鉴别及测序分析发现,天蓝淡红链霉菌SIPI1482来源的doxA基因和链霉菌C5来源的序列完全相同.
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受SnpR激活的snpA启动子调控的柔红霉素C-14羟化酶基因的克隆、表达和应用研究
尝试将柔红霉素经微生物转化法合成多柔比星,从Streptomyces sp.C5中通过PCR的方法扩增了含核糖体结合位点、大小为1.3kb的编码C-14柔红霉素羟化酶的doxA基因及受SnpR调控的snpA启动子.终构建的重组质粒pYG908,能表达一大小为46.6ku的蛋白条带,CO结合差光谱分析表明所表达的酶在450nm有吸收峰.重组质粒转化Streptomyces lividans TK24后,工程菌能转化柔红霉素生成和多柔比星保留时间一样的产物.