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产表阿霉素重组波赛链霉菌的构建
表阿霉素是一种重要的蒽环类抗肿瘤抗菌药,主要通过化学半合成生产.本研究通过定点突变敲除波赛链霉菌的酮基还原酶dnmV基因,随后导入表异构化的酮基还原酶基因aveBIV,构建基因工程菌EPI-1,其表阿霉素产量达到47 mg/L.在此基础上,探讨了柔红糖胺合成及糖基化相关基因过表达对表阿霉素合成的影响.后,将质粒pAve-des-SQ导入dnmV敲除菌株中,得到了工程菌EPI-2,表阿霉素产量提高了102％,达到95 mg/L.在5L发酵罐上进行发酵小试研究,表阿霉素产量为110 mg/L,具有产业化应用的潜力.
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天蓝淡红链霉菌SIPI1482中柔红霉素C-14羟化酶基因的克隆和序列分析
根据GenBank中公布的两种柔红霉素C-14羟化酶基因(doxA)的序列,设计引物并通过PCR扩增方法从天蓝淡红链霉菌SIPI1482中扩增出约1.4kb的目的片段,其中包括了长度为1269bp的doxA全长序列,而同时从波赛链霉菌SIPI40141中没有扩增出基因片段.将扩增出的doxA基因和载体质粒pBlue-script KS连接后构建了质粒pYG510,通过PCR扩增、酶切鉴别及测序分析发现,天蓝淡红链霉菌SIPI1482来源的doxA基因和链霉菌C5来源的序列完全相同.
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波赛链霉菌dnrK基因中断突变株代谢产物鉴定
目的 鉴定波赛链霉菌HS062(柔红霉素工业菌株)dnr基因中断突变株新次级代谢产物.方法 将dnrK基因中插入了阿泊拉霉素抗性基因及“海正”标记片段的中断载体pBSSP-KA导入波赛链霉菌HS062,筛选获得dnrK插入失活的突变株DK55,通过HPLC-MS和NMR对DK55菌株产生的新代谢产物进行结构鉴定.结果 dnrK中断突变株DK55产生了一个新的蒽环类代谢产物,该化合物经结构鉴定为histomodulin,并且其效价远远高于原产物柔红霉素.结论 本研究通过基因工程手段获得高产histomodulin菌株,为该化合物的应用研究打下了基础;同时,探讨了工业菌株中dnrK基因敲除后菌株代谢产物变化原因, 为进一步提高柔红霉素及其衍生物的产量提供了新的思路.
关键词： 波赛链霉菌 dnrK Histomodulin 基因中断
