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人La蛋白突变体表达质粒的构建及诱导表达纯化
目的:构建人La蛋白(human La protein,hLa)突变体表达质粒,并在大肠杆菌中表达野生型La蛋白及各突变体.方法:利用定点突变技术,对野生型人La蛋白的原核表达质粒pET28b-hLa进行定向缺失突变,将得到的3个突变体Mu1(A366)、Del1(A235~276)、Del2(A119~150)分别克隆至pET28b中,获得野生型人La蛋白突变体的表达质粒,并在BL21(DE3)和Rosetta2两种不同宿主菌中和不同浓度的IPTG诱导条件下进行蛋白表达水平的比较.结果:所获得的人La蛋白突变体的基因编码序列经测序符合序列设计的要求,表达产物经SDS-PAGE分析可见,在相对分子质量47 000处出现一明显条带,与预期的相对分子质量一致.结论:三个位点的序列改变并没有明显影响hLa蛋白的表达,在补充密码子的宿主菌Rosetta2中的表达量优于宿主菌BL21(DE3).
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La蛋白干预HBV RNA代谢的研究进展
目的:从La蛋白共价修饰角度,分析La蛋白磷酸化与去磷酸化对其功能的影响.探讨La蛋白与HBV RNA相互作用的分子机制.方法:综述近期人La蛋白的国内外相关文献.结果:人La蛋白是HBV RNA代谢相关蛋白,使HBV RNA免受核酸降解而维持HBV的生命周期,磷酸化是La的激活方式,通过小分子封闭磷酸化位点,可能成为研制抗HBV新药的方向之一.结论:La蛋白可能作为研制抗HBV感染药物的新靶点,拥有更大的研究前景.