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一种可提高成纤维细胞在三维支架上种植效率和均匀性的简单方法
目的:尝试使用简单的动态种植方法来提高成纤维细胞在三维支架上的种植效率和均匀性,以更有效地构建组织工程皮肤.方法:成纤维细胞以下列方式在胶原海绵支架进行种植和培养:(1)振荡种植振荡培养;(2)振荡种植静止培养;(3)静止种植静止培养.定期取样品进行电镜、组织学检测及细胞计数分析.结果:细胞加入24 h后振荡种植的样品比静止种植的样品细胞在支架内分布更为均匀,同时振荡种植的样品细胞贴壁率[(56±5)%]明显高于静止种植的样品细胞贴壁率[(31±4)%,P<0.01].振荡种植振荡培养的样品在培养过程中细胞脱离支架而死亡,因此放弃了这些样品的继续培养.振荡种植静止培养的样品和静止种植静止培养的样品细胞一直保持正常的伸展状态.在培养过程中细胞向支架内部的长入速度及支架中的活细胞总数振荡种植静止培养的样品一直高于静止种植静止培养的样品.结论:采取振荡种植的方式种植细胞可明显提高成纤维细胞在三维支架上种植的效率和分布均匀性.
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振荡模式下TGF-β1基因转染成肌诱导化ADSCs构筑工程化平滑肌的研究
目的:分析工程化平滑肌的体外生物学行为,评估构筑工程化平滑肌的理想方法,为修复女性尿道损伤提供新的方法.方法:转化生长因子β<,1>腺病毒载体(Ad-TGF-β<,1>)转染兔脂肪基质细胞(ADSCs),观察细胞形态、转染效率及细胞周期变化.接种到壳聚糖/胶原(Cs/Col)支架,构建工程化平滑肌:A组:凝胶+生长因子+振荡种植静态培养,B组:凝胶+生长因子+静态种植静态培养,C组:凝胶+基因转染+振荡种植静态培养,D组:静态种植静态培养.第1天、4天、8天、12天、16天、20天、24天、28天,电镜、共聚焦观察,检测细胞存活率、细胞增殖、Ⅲ型胶原及DNA含量.结果:C组细胞骨架发育完善,生长旺盛、细胞外基质丰富,细胞存活率高于其他组(P<0.05),增殖活力、Ⅲ型胶原及DNA含量均高于其他组(P<0.05).结论:凝胶包埋基因与振荡模式能加速种子细胞扩增及优化工程化平滑肌构建质量.为细胞移植治疗尿道损伤开创了新的模式.
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动态种植法提高在去细胞猪瓣支架上种植内皮细胞效率和均匀性的研究
目的:尝试使用简单的动态种植方法来提高内皮细胞在去细胞牛心包支架上的种植效率和均匀性,以更有效地构建组织工程瓣膜.方法:采用胰酶-去垢剂法制备去细胞牛心包. 内皮细胞以下列方式在去细胞牛心包支架进行种植和培养: ①振荡种植振荡培养(OO);②振荡种植静止培养(OS);③静止种植静止培养(SS). 定期取样品进行电镜、组织学检测及细胞计数分析. 结果:细胞加入24 h后振荡种植的样品比静止种植的样品细胞在支架内分布更为均匀,同时振荡种植的样品细胞贴壁率[ (36±3) %]高于静止种植的样品细胞贴壁率[(21±2)%, P<0.05]. 振荡种植振荡培养的样品在培养过程中细胞脱离支架而死亡,因此放弃了这些样品的继续培养. 振荡种植静止培养的样品和静止种植静止培养的样品细胞一直保持正常的伸展状态. 在培养过程中支架上的活细胞总数振荡种植静止培养的样品一直高于静止种植静止培养的样品. 结论:采取振荡种植的方式种植细胞可明显提高内皮细胞在三维支架上种植的效率和分布均匀性.
