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视前区调控因子2文献资料
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Porf-2基因过表达慢病毒载体的构建以及神经细胞的转染
目的 构建视前区调控因子2(Porf-2)与绿色荧光蛋白(GFP)共表达的慢病毒载体,包装慢病毒并体外感染神经细胞.方法 根据GenBank中基因信息,设计Porf-2的引物,采用PCR扩增Porf-2基因片段;运用基因重组技术,双酶切Porf-2,并将其克隆至pLVX-IRES-ZsGreen1载体,经酶切、测序加以鉴定重组质粒.将成功构建的质粒与包装系统VSVG、△89质粒共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度.结果 经酶切和测序鉴定表明成功构建了pLVX-Porf-2-IRES-ZsGreen1的基因重组慢病毒载体;将成功包装的病毒感染NG108细胞、海马原代神经元以及神经干细胞后,可观察到大量绿色荧光表达;Western blotting证实Porf-2成功过表达.结论 成功构建Porf-2与GFP基因共表达的慢病毒载体、包装慢病毒,并感染NG108、海马原代神经元以及神经干细胞.
