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沉默转化生长因子β1对肝星状细胞-T6生长及增殖的影响
目的 观察沉默转化生长因子β1(TGFβ1)对肝星状细胞(HSC)-T6生长及增殖的影响.方法 用具有高效感染力的TGFβ1 shRNA慢病毒液感染HSC-T6细胞,以未经感染或经空病毒感染的HSC-T6细胞作对照.倒置荧光显微镜下观察HSC-T6细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达变化;CCK-8法检测TGFβ1 shRNA慢病毒对HSC-T6细胞生长及增殖的影响;RT-PCR和Western blotting分别检测HSC-T6细胞TGFβ1及增殖细胞核抗原(PCNA)基因及其编码蛋白的表达,并予以定量分析.结果 经TGFβ1 shRNA慢病毒感染的HSC-T6细胞显著表达GFP.CCK-8法检测结果显示:经TGFβ1 shRNA慢病毒感染的HSC-T6细胞的生长及增殖慢于对照细胞,培养48 h后差异有统计学意义(P＜0.01).RT-PCR和Western blotting检测结果显示:TGFβ1shRNA慢病毒能有效沉默HSC-T6细胞TGFα1,并下调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达,与对照细胞的差异有统计学意义(P＜0.01).结论 沉默TGFβ1能明显抑制HSC-T6的生长及增殖,并下调其核抗原PCNA的表达.
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肾上腺髓质素对大鼠肝星状细胞表达细胞周期蛋白的影响
目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)对活化肝星状细胞(HSC)表达细胞周期蛋白的影响.方法 采用不同浓度的ADM对HSC-T6细胞进行干预12h、24h和48h.采用MTT法检测HSC-T6细胞增殖;采用SABC法检测细胞增殖核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期素依赖性激酶抑制因子P21waf1的表达.结果 在ADM10-7mol/L浓度下作用12h,24h,48h,细胞生长抑制率逐渐增加(分别是7.88%,17.58%,18.79%);在ADM10-7 mol/L作用24h时, HSC的PCNA、cyclin D1和 P21waf1表达的平均光密度分别为0.387±0.023、0.454±0.029和0.508±0.011,而对照组分别为0.246±0.030、0.209±0.014和0.401±0.033(t值分别为5.149、5.752和5.299,P＜0.05),差异有显著性.相关性分析表明,PCNA和cyclin D1的变化呈正相关趋势(r=0.834,P＜0.05),而PCNA和P21waf1呈负相关趋势(r=-0.770,P＜0.05),cyclin D1和P21waf1呈负相关趋势(r=-0.796,P＜0.05).结论 肾上腺髓质素可抑制HSC-T6细胞增殖.ADM作用HSC可能通过调控HSC的细胞周期,抑制PCNA和cyclin D1表达,促进P21waf1表达,从而发挥抑制HSC增殖作用.
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慢病毒介导的脯氨酰寡肽酶过表达对大鼠肝星状细胞功能的影响
目的 探讨携带脯氨酰寡肽酶(prolyloligopeptidase,POP)基因的慢病毒转染大鼠肝星状细胞系-T6 (hepatic stellate cellsT6,HSC-T6)对其生物学功能的影响,以揭示其在肝脏炎症与纤维化发生、发展中的作用.方法 采用大鼠HSC-T6作为研究对象,设计合成携带大鼠POP基因的慢病毒,转染HSC-T6;通过ELISA方法检测各组HSC内Ac-SDKP水平;Real-time-PCR法检测各组HSC内相关基因表达量变化(POP、TGF-β1、α-SMA、MCP-1、Col Ⅰ);Western blotting方法检测各组HSC中相关蛋白表达变化(POP、TGF-β1、α-SMA、Smad7、p-Smad2/3、PPAR-γ);CCK-8和流式细胞术检测转染POP对HSC增殖和凋亡的影响.结果 慢病毒能高效感染HSC-T6并表达有活性的POP蛋白,与正常对照组及空病毒组相比,POP慢病毒感染的细胞内Ac-SDKP明显升高,Smad7、PPAR-γ蛋白表达显著升高,而α-SMA表达显著下降;POP慢病毒感染的细胞内MCP-1及α-SMA mRNA表达显著下调;此外,POP可促进HSC-T6增殖生长,而对HSC-T6凋亡无影响.结论 POP在HSC内可能发挥抗炎、抗纤维化作用,其机制可能通过促进Smad7及PPAR-γ的表达,抑制MCP-1及α-SMA的表达而发挥作用.
