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L型钙离子通道Cav1.2在大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化中的作用
目的 利用慢病毒转染系统构建Cav 1.2基因沉默的大鼠根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAPs),探讨Cav 1.2在大鼠牙乳头干细胞成牙向分化中的作用.方法 取3周龄SD大鼠,采用酶消化法获取大鼠根尖牙乳头干细胞,取第二代大鼠根尖牙乳头干细胞进行克隆平板实验鉴定其增值能力;采用慢病毒转染的方法构建Cav 1.2基因沉默Sh-Cav 1.2牙乳头干细胞及对照组Luc-Cav 1.2牙乳头干细胞,RT-PCR及Western印迹法鉴定其转染效率,并诱导其向成牙本质细胞样细胞分化;在成牙向诱导分化第10天,RT-PCR及茜素红S染色观察Cav 1.2对大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化的影响.结果 分离获得较强增殖能力的大鼠牙乳头干细胞,其中每200个细胞可形成6～10个克隆;荧光倒置显微镜下转染48 h,Sh-Cav 1.2及Luc-Cav 1.2均呈现绿色荧光,转染效率均达到90％;在两组细胞成牙向诱导过程中,实验组Sh-Cav 1.2牙乳头干细胞成牙相关基因DSPP的表达及钙化结节的形成均明显低于对照组Luc-Cav 1.2.结论 L型钙离子通道Cav 1.2对大鼠根尖牙乳头干细胞成牙向分化有重要作用.
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黄瓜籽正丁醇提取物对人牙髓干细胞增殖及成牙向分化的影响
目的:探讨黄瓜籽正丁醇提取物(n-butanol extract of cucumis sativus seeds,CSB)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖及成牙向分化能力的影响.方法:体外扩增培养hDPSCs,采用细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)法检测CSB对hDPSCs增殖能力的影响;通过碱性磷酸酶(ALP)染色及活性测定、Western blot检测牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)和Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,COL Ⅰ)等矿化相关蛋白的表达水平观察细胞成牙向分化能力的变化.结果:CCK-8结果显示,与对照组相比,100 mg/L CSB可显著促进hDPSCs的增殖(P＜0.05),500 mg/L组则明显抑制hDPSCs的增殖(P＜0.05);经矿化诱导后,100 mg/LCSB组ALP染色明显加深,活性显著升高(P＜0.05);Western blot结果显示100 mg/L CSB组DSPP和COL Ⅰ的表达均高于对照组(P＜0.05).结论:适宜浓度的CSB可促进hDPSCs的增殖及成牙向分化.
