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人牙髓干细胞在钛金属表面向成骨细胞样细胞分化的实验研究
目的：探讨矿化液诱导条件下人牙髓干细胞( human dental pulp stem cells,HDPSCs)在钛金属表面向成骨细胞样细胞分化的潜力。方法将HDPSCs接种于钛金属板表面,于第3、7d时观察其增殖状态。将HDPSCs接种于钛金属板表面进行矿化液诱导,于诱导的第0、3、5、7、14、21、28d时,采用RT-PCR检测其牙本质涎磷蛋白( DSPP)、碱性磷酸酶( ALP)、骨涎蛋白( BSP)和骨钙素( OCN)的基因表达。 Western印迹分析、免疫荧光检测BSP及OCN蛋白表达。对照组为矿化液诱导培养皿中的HDPSCs,检测指标、方法基本相同,免疫细胞化学染色检测OCN蛋白表达。结果钛金属板上 HDPSCs增殖迅速,表现出良好的生物相容性。两组细胞均自诱导第3天ALPmRNA呈高表达、DSPP始终不表达。培养皿组BSP、OCNmRNA于第5天开始表达,并随时间延长而表达增高；钛金属组BSP、OCNmRNA表达于第14天出现第一峰值,随后有所下降,28天再次升高。两组BSP蛋白表达趋势与其RT-PCR结果一致,第5天 OCN染色阳性。结论钛金属表面 HDPSCs 经矿化液诱导向成骨细胞样细胞分化。
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人牙髓干细胞的生物学特性研究及其应用进展
临床上,由牙周病、外伤、肿瘤以及骨质疏松症等导致的牙颌面软硬组织缺损发病率高,患者进行牙颌面软硬组织缺损修复的迫切需求较大,自体干细胞介导的组织再生修复成为国内外研究的热点.人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)是一类存在于人牙髓组织(乳牙、恒牙)中具有较强的自我更新和多向分化潜能的间充质干细胞,易于获取和保存,免疫原性低,较人体其他间充质干细胞更具优势,在合适的体内或体外环境下可分化为多种人体细胞,为组织、器官修复和自体、异体移植治疗相关疾病提供细胞来源.本课题组关于间充质干细胞的新研究,首次发现因胚层起源不同老年人颌骨骨髓间充质干细胞的成骨分化能力优于四肢骨骨髓间充质干细胞;首次成功分离培养高龄老年人(≥80岁)牙髓间充质干细胞,经流式分析鉴定细胞高表达间充干细胞表面标记,具有一定的增殖和分化潜能.本文将结合课题组前期研究,通过对牙髓间充质干细胞相关的研究文献进行分析,对牙髓间充质干细胞的分离培养与鉴定、一般生物学特性加以总结,对体外培养中传代以及年龄原因等所致的细胞衰老进行探讨,并与人体其他部位来源的间充质干细胞的生物学特性进行对比分析;探讨牙髓间充质干细胞在再生医学及疾病治疗领域的应用,特别是在口腔组织缺损修复中的应用,主要包括在牙周和骨组织缺损的再生修复、牙髓神经的再生修复以及“生物牙根”重建中的应用及探索,并对存在的问题和难点进行分析,为未来牙髓间充质干细胞在临床更加广泛地应用提供理论依据.
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人牙周膜干细胞与人牙髓干细胞的表型及生长特性比较
目的:比较人牙周膜干细胞(human Periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)和牙髓干细胞(humanDental pulp stem cells,hDPSCs)的表型及生长特性,为深入研究这两种细胞生物学特性提供依据.方法:组织块法培养获得原代人牙周膜细胞和牙髓细胞,采用有限稀释法分别对两者克隆化培养、分离纯化得到hPDLSCs和hDPSCs,采用倒置相差显微镜观察细胞形态、CCK8法检测细胞生长活性并绘制两者生长曲线、流式细胞技术检测干细胞表面标志物,分析比较两种细胞集落形成率(colony formation ratio,CFR).结果:hPDLSCs和hDPSCs镜下形态相似,生长曲线均呈“S”形,牙周膜细胞中STRO-1表达hPDLSCs阳性率为15.88±0.48％,牙髓细胞中STRO-1表达hDPSCs阳性率为11.86±0.43％,两者无显著性差异.两种干细胞均阳性表达间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)表面标志物STRO-1、CD29、CD44、CD90、CD73和血管内皮标志物CD105,其中STRO-l、CD29、CD90、CD73、CD105及CD166百分率达90％以上,阴性表达造血干细胞表面标志物CD34和CD45.hDPSCs的集落形成率(4.31±0.08％)显著高于hPDLSCs的集落形成率(2.68±0.06％)(P＜0.05).结论:hPDLSCs和hDPSCs细胞的形态相似,均高表达MSCs表面特异性标志物,hDPSCs的集落形成率显著高于hPDLSCs,说明hDPSC自我更新能力较hPDLSCs强,可为深入研究这两种干细胞提供实验依据.
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ADAM28反义核酸对人牙髓干细胞生物学特性的影响
目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义核酸(AS-ODN)对人牙髓干细胞(HDPSCs)增殖、分化、凋亡特性的影响并分析可能的作用机制.方法:体外分离培养、鉴定HDPSCs,将FITC荧光标记的ADAM28反义核酸(AS-ODN)和正义对照(S-ODN)分别转染HDPSCs,用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测ADAM28 AS--ODN转染48h后的封闭效率,应用四唑盐(M1vr)比色法,酶动力学法和流式细胞术(FCM)分别检测实验各组HDPSCs的增殖活性、碱性磷酸酶(AKP)的分泌活性以及细胞周期分布和凋亡百分比.采用SPSS13.0软件包的SNK检验进行统计学分析.结果:AS-ODN转染组ADAM28mRNA和蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05),细胞增殖活性、增殖指数明显降低(P<0.05),碱性磷酸酶(AKP)分泌水平和细胞凋亡率显著增高(P<0.05).结论:ADAM28 AS-ODN可显著抑制HDPSCs的增殖并影响细胞周期的变化,促进AKP的分泌活性并诱导HDPSCs的凋亡.
关键词： 金属蛋白酶解离素28 人牙髓干细胞 增殖 分化 凋亡 -
CCN2对人牙髓干细胞增殖及分化的影响
目的：探讨CCN2对体外培养的人牙髓干细胞增殖、分化的影响。方法收集在延安大学附属医院口腔修复科因正畸或阻生而拔除的牙齿，酶消化法获得人牙髓干细胞，光镜下进行形态学观察，免疫荧光法检测细胞表面标志蛋白的表达。取对数生长期牙髓干细胞，加入不同浓度的CCN2将其分为CCN26.25、12.5、25、50、100μg/L组，同时设置阴性对照组；采用噻唑蓝(MTT)法检测CCN2对牙髓干细胞增殖作用的影响，通过碱性磷酸酶及Western blot检测CCN2对牙髓干细胞分化的影响。结果人牙髓干细胞呈集落状生长，免疫荧光法检测STRO-1呈阳性表达，CCN26.25、12.5、25、50、100μg/L组 OD值分别为(0.78±0.05)、(0.91±0.03)、(1.23±0.09)、(1.57±0.11)、(1.61±0.15)，均高于对照组(0.51±0.02)，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；细胞增殖实验表明，CCN2可显著促进牙髓干细胞的增殖；此外，CCN2可促进牙髓干细胞碱性磷酸酶的活性，并呈现浓度±赖关系，CCN26.25、12.5、25、50、100μg/L组OD值分别为(0.32±0.04)、(0.43±0.04)、(0.61±0.03)、(0.79±0.06)及(0.81±0.07)，与对照组(0.19±0.03)比较，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；Western blot结果表明，CCN2可诱导牙本质细胞特异性标志蛋白的表达。结论 CCN2可促进牙髓干细胞向成牙本质细胞的分化。
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Cbfα1在人牙本质基质蛋白1基因启动子结合位点的初步定位
目的 对核心结合因子α1(core binding factor α1,Cbfα1)在人牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)基因启动子上结合位点进行初步定位.方法 DMP1基因启动子-505～+86 bp区存在成牙本质细胞分化重要的转录调控因子Cbfα1的作用位点,为验证它对DMP1是否具有直接的转录调控作用,将计算机分析结果Cbfα1结合位点(TTGGGAACCACAAGA,-199～-185 bp)进行体外定点基因突变,双酶切和DNA测序鉴定突变效果,突变后的质粒pGL3-P’-505～-86和PCMV-Osf2共转染至体外培养的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)中,报告基因检测系统检测虫萤光素酶活性的改变,单纯转染pGL3-P-505～+86组作为空白对照.结果 与PCMV-Osf2共转染后,突变pGL3-P’-505～+86共转染组在HDPSCs中的荧光素酶活性较未突变pGL3-P 505～+86共转染组明显下降(P＜0.05),突变pGL3-P’-505-+6共转染组较单纯转染pGL3-P505-+86组活性稍有升高,但无统计学意义(P＞0.05).结论 Cbfα1对DMP1基因转录具有直接的调控作用,DMP1启动子-199～-185 bp区是Cbfα1的结合位点之一.
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HDPSCs在体外促进血管再生的潜能及其分子机理研究
目的 探讨人牙髓干细胞(HDPSCs)在体外促进血管再生的潜能及其机制.方法 体外分离培养HDPSCs,同时选取人微血管内皮细胞(HMEC)随机分为阴性对照组,阳性对照组和HDPSCs组,其中阴性对照组采用不合胎牛血清-(FBS)的-MEM培养基,阳性对照组加入含100ml/l FBS的-MEM培养基,HDPSCs组加入HDPSCs培养.采用MTS法检测HEMC细胞增殖情况,采用Trans-well小室实验检测HEMC细胞迁移能力,采用Western blot法检测ERK1/2、p-ERK1/2、p38和p-p38蛋白表达,并对比各组检测结果.结果 阳性对照组培养24h和48h HEMC细胞OD值分别为(0.511±0.099)和(0.624±0.103),明显高于阴性对照组和HDPSCs组(P＜0.05);HDPSCs组培养24h和48h HEMC细胞OD值分别为(0.390±0.098)和(0.455±0.096),明显高于阴性对照组(P＜0.05);阳性对照组HEMC细胞迁移数为(115.64±12.06)个,明显多于阴性对照组和HDPSCs组(P＜ 0.05);HDPSCs组HEMC细胞迁移数为(75.60±9.81)个,明显多于阴性对照组(P＜0.05);阳性对照组ERK1/2、p-ERK1/2、p38和p-p38蛋白相对表达量分别为(0.947±0.037)、(0.867±0.043)、(0.833±0.069)和(0.792±0.086),明显高于阴性对照组和HDPSCs组(P＜ 0.05);HDPSCs组ERK1/2、p-ERK1/2、p38和p-p38蛋白相对表达量分别为(0.528±0.046)、(0.422±0.050)、(0.554±0.074)和(0.512±0.077),明显高于阴性对照组(P＜0.05).结论 HDPSCs在体外可促进血管内皮细胞增殖和迁移,可能与其参与ERK1/2和p-p38MAPK信号通路有关.
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人牙髓干细胞在三种支架材料上黏附与增殖的研究
目的 研究人牙髓干细胞(hDPSCs)在羟基磷灰石磷酸三钙(HA-TCP)、聚乙醇酸(PGA)和聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)三种支架材料上的黏附与增殖情况.方法 体外分离培养hDPSCs并进行鉴定.将hDPSCs分别接种于HA-TCP、PGA和PLGA支架上,通过扫描电镜和细胞计数观察细胞在支架上的黏附、增殖及基质分泌情况,采用方差分析对细胞计数结果进行统计学分析.结果 PGA和PLGA支架材料上黏附的细胞数量显著高于HA-TCP组(P＜0.05),且PLGA组高于PGA组.细胞在三种支架材料上的增殖能力无显著差异(P＞0.05),三种支架上均有丰富的基质形成,细胞的生长状态和基质分泌无明显差别,但PGA组可见支架降解产物.结论 PLGA是较适宜hDPSCs黏附和增殖的支架材料.
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转化生长因子β1对人牙髓干细胞成骨分化作用研究
目的 研究不同浓度的转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成骨分化的影响.方法 采用酶消化法提取hDPSCs,通过流式细胞术鉴定干细胞的表面标记物.实验组利用含有不同浓度TGF-β1(1、5、10、20 ng/mL)的α-MEM培养细胞,对照组以不合TGF-β1的α-MEM培养细胞,分别在第7天和14天时,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测成骨相关因子的表达情况.在第21天时,通过茜素红染色观察矿化结节形成情况.结果 显微镜下可见hDPSCs呈长梭形,形态类似成纤维细胞.流式细胞术检测结果显示细胞呈CD73和CD90阳性表达,CD31、CD34和CD45阴性表达,具有典型的干细胞表面标记物.qRT-PCR结果表明,含有TGF-β1的各实验组均能明显促进成骨相关因子Runt相关转录因子2(Runx-2)、骨涎蛋白(BSP)和骨钙素(OCN)mRNA的表达.第7天时,TGF-β1浓度为1 ng/mL组的Runx-2、BSP和OCN的表达水平分别为对照组的11.3倍、8.7倍和11.7倍,明显高于其他各浓度组(P＜0.05);第14天时,1 ng/mL组的Runx-2、BSP和OCN表达水平分别为对照组的5.08倍、7.17倍和3.03倍(P＜0.05),20 ng/mL组BSP表达水平与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).茜素红染色显示各浓度的TGF-β1均能促进hDPSCs矿化结节形成.结论 TGF-β1可以促进hDPSCs的成骨分化.
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英文文摘
1．人血清在体内外可促进人牙髓干细胞的成骨分化（英）／Pisciotta A…／／PLoS One．-2012，7（11）．-e50542
人牙髓干细胞（hDPSCs）是以细胞为基础的组织工程研究中很有前途的种子细胞来源，易获取，对病人侵袭性低，细胞可自我更新和多向分化。目前，间充质干细胞体外培养通常添加含胎牛血清（FCS）的培养基。FCS 含大量生长因子，可促进细胞在塑料表面的附着、增殖和分化。然而，动物源性的 FCS 可能传播疾病，甚至导致异体免疫反应。因此， FCS 的替代物可避免 FCS 的上述不足。我们的研究证实人血清（HS）是 FCS 合适的代替者，将其加入培养基中可提高hDPSCs的增殖率，并促进其在体外的成骨分化。将 hDPSCs在体外 HS 培养基中预分化培养10 d后植入大鼠的颅骨区，能够修复临界大小颅骨缺损。这些研究表明，hDPSCs 体外培养及分化过程中，HS 是 FCS 的有效代替品。 -
牙本质非胶原蛋白对人牙髓干细胞增殖活性及矿化能力的影响
目的:明确牙本质非胶原蛋白(dentin non-collagenous proteins,dNCPs)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖及矿化能力的影响.方法:通过细胞活性噻唑蓝(MTT)比色法、碱性磷酸酶(ALP)活性检测、茜素红钙化结节染色和氯代十六烷基吡啶定量分析钙离子浓度,检测10μg/mL dNCPs对hDPSCs增殖和矿化能力的影响.结果:dNCPs分别诱导1、3、5、7、9d,人牙髓干细胞增殖活性与对照组相比无显著性差异(P>0.05);诱导3、5、7d时,人牙髓干细胞ALP活性明显上调,与对照组相比有统计学差异(P>0.05);诱导3、5、7d时,人牙髓干细胞ALP活性明显上调,与对照组相比有统计学差异(P<0.01);诱导2周后,茜素红染色显示10μg/mLdNcPs组出现较大钙化结节,定量分析显示,其形成钙化结节的能力明显高于对照组(P<0.001).结论:10μg/mLdNcPs可明显促进人牙髓干细胞的矿化能力,对其增殖活性的影响则不明显.
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人牙髓干细胞低氧培养的研究进展
细胞的缺氧应答反应是由多因子多通路调控的.研究表明,低氧条件下培养人牙髓干细胞可提高其增殖和分化潜能,促进血管及骨的再生,对细胞的凋亡和旁分泌作用也有显著影响.提示低氧环境下人牙髓干细胞相关生物学特性的改变对牙髓组织的修复与再生有着重要意义,并有望为牙髓损伤提供潜在治疗手段,促进组织工程和细胞疗法的进一步发展.
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英文文摘
3．丙戊酸抑制组蛋白去乙酰化酶使人牙髓干细胞和成骨细胞骨钙素基因表达下调：为 HDAC2参与这一过程提供依据（英）／Paino F…／／Stem Cells．－2014，32（1）．－279－289
由于成体间充质干细胞（如牙髓干细胞）可向多种组织特异性细胞分化（尤其是成骨细胞向分化），因此研究者们将这些干细胞用于组织工程研究。近年来，干细胞表观遗传学研究表明，特定的组蛋白改变和修饰酶在细胞分化过程中起重要作用。丙戊酸（VPA ）是一种组蛋白脱乙酰基酶（HDAC）的选择性抑制剂，研究表明，VPA 可增强成骨细胞向分化，但骨钙素作为分化后期标志，其表达下降。本研究旨在探讨 VPA 对牙髓干细胞分化的影响。低浓度的 VPA不会降低细胞活力、增殖和细胞周期分布，但它足以通过上调骨桥蛋白和骨涎蛋白的表达，使基质矿化明显增加。与之相反，在转录水平上来看，骨钙素水平降低，这与 HDAC2受到抑制密切相关。事实上，通过 shRNA 介导的 HDAC2沉默对成骨细胞相关标记物表达的影响与 VPA 刺激的影响相类似。我们得出结论，VPA 不会诱导成骨细胞的终末分化，但可刺激不完全成熟细胞的产生。此外，通过 RNA 干扰可特异性抑制单个 HDAC，从而使成骨向分化能力增强，表现出一种选择效应。 -
凝胶样支架材料对三维培养的人牙髓干细胞增殖的影响
目的 目的评价牙髓组织工程中不同浓度的两种可注射性凝胶样支架材料对牙髓干细胞增殖的影响.方法 配制不同浓度的Ⅰ型胶原、肽段水凝胶(Puramatrix)支架材料,将牙髓干细胞分别接种于各组支架材料上;CCK8方法检测细胞增殖情况;活死细胞试剂盒染色观察细胞数量及形态.结果 接种在各浓度支架材料上的牙髓干细胞均生长良好,其中1％的Ⅰ型胶原支架和0.25％的肽段水凝胶支架对牙髓干细胞的增殖有明显的促进作用;活死细胞染色观察牙髓干细胞在各浓度的两种支架材料中均生长良好,活细胞数量随培养时间的延长呈递增趋势;细胞充分伸展,呈纺锤型.结论 适于牙髓干细增殖的Ⅰ型胶原及肽段水凝胶(Puramatrix)支架浓度分别为1％及0.25％.
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模拟微重力影响人牙髓干细胞的矿化能力与RhoA-Rho激酶信号通路相关性研究
目的：初步研究RhoA-Rho激酶信号通路在模拟微重力( Simulated Microgravity,SMG)影响人牙髓干细胞( human dental pulp stem cells,hDPSCs)矿化过程中的作用。方法将经酶消化法分离、纯化后的人牙髓干细胞体外扩增培养,以1×106细胞接种于PLGA支架上,分别于模拟微重力下及普通重力下矿化诱导液中培养,72 h后收集细胞,采用Western Blot检测RhoA蛋白表达；此外,在重力条件下采用Rho激酶抑制剂Y-27632,以矿化诱导液培养组作为对照组,检测矿化诱导3、5、7、10 d两组碱性磷酸酶( Alkaline phosphatase,AKP)活性变化,采用Western Blot检测矿化诱导10 d,成牙本质相关蛋白牙本质基质蛋白(dentin matrix protein-1,DMP-1)、牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)的表达,采用茜素红染色法检测矿化诱导21 d,矿化结节形成水平。结果模拟微重力下,人牙髓干细胞中RhoA蛋白的表达下调；在普通重力矿化诱导条件下,加入抑制剂Y-27632后,各时间点细胞AKP表达水平均较对照组有所降低；矿化诱导10 d,成牙本质相关蛋白DSP、DSPP、DMP-1表达明显下调,矿化诱导21 d,矿化结节形成同样有所减少。结论模拟微重力下,RhoA蛋白表达水平下调；抑制Rho激酶的表达,可降低hDPSCs矿化能力,提示RhoA-Rho激酶信号通路可能参与模拟微重力对hDPSCs矿化能力的影响。
关键词： 人牙髓干细胞 模拟微重力 RhoA-Rho激酶信号通路 矿化 -
整合素α6对模拟微重力下人牙髓干细胞粘附能力的影响
目的:探究整合素α6对模拟微重力下人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)粘附能力的影响.方法:以PLGA支架为载体,将采用酶消化法培养的hDPSCs接种在PLGA支架上,分普通重力组和模拟微重力组培养72 h,Western blot检测整合素α6 (Integrin α6)、整合素αv(Integrin αv)、整合素p1(Integrin β1)、粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)、磷酸化粘着斑激酶(phospho-FAK)的达;si-RNA转染hDPSCs,抑制整合素α6表达,DAPI荧光染色检测转染后hDPSCs在PLGA支架上的粘附数量,Western blot检测转染后hDPSCs中整合素β1、FAK、phospho-FAK的表达.结果:模拟微重力下,整合素α6、phospho-FAK蛋白水平上调(P＜0.05),整合素αv、整合素β1和FAK的蛋白水平未见显著性差异;si-RNA转染的hDPSCs粘附能力、phospho-FAK蛋白水平均低于对照组(P＜0.05),整合素β1和FAK的蛋白水平未见显著性差异.结论:模拟微重力下,hDPSCs在PLGA支架上粘附能力增强可能与整合素α6及其下游信号分子FAK的表达水平上调相关.
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Rho激酶抑制剂Y-27632对人牙髓干细胞增殖能力的影响
目的:初步研究Rho激酶抑制剂Y-27632对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖能力的影响.方法:采用体外贴壁式培养法培养人牙髓干细胞,应用Rho激酶抑制剂Y-27632,根据培养条件,分为普通培养液培养组(Con)及普通培养液十抑制剂Y-27632培养组(Con+Y),采用MTT法检测两种培养条件下人牙髓干细胞培养24、48、72、96 h细胞活性;采用DAPI染色法及流式细胞定量检测技术(FCM)比较两组在培养48 h的细胞数量及细胞周期分布情况.结果:MTT结果显示,实验组hDPSCs细胞增殖曲线较对照组明显上移,且增殖高峰期提前;培养48 h,DAPI染色结果显示,实验组细胞总数量明显多于对照组;FCM结果显示,对照组G0/G1期细胞比例为(66.8±6.84)％,S期细胞比例为(25.17±0.62)％,实验组G0/G1期细胞比例为(58.59±1.76)％,S期细胞比例为(31.34±1.16)％,实验组S期细胞比例明显高于对照组(P＜0.05).结论:Rho激酶抑制剂Y-27632促进入牙髓干细胞DNA合成、细胞分裂及增殖.
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模拟微重力对人牙髓干细胞细胞骨架及迁移能力影响的研究
目的:初步研究模拟微重力(simulated microgravity,SMG)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)细胞骨架及迁移能力影响的信号通路机制.方法:采用酶消化法分离培养hDPSCs,并将其接种于PLGA支架上进行模拟微重力培养及普通重力培养.72 h后收集细胞,行Realtime-PCR检测LARG(leukemiaassociated Rho GEF factor)基因的mRNA相对定量表达;拖拽实验检测Rho A-GTP表达情况;western blot检测RhoA及下游信号分子LIMK-P蛋白表达情况.结果:模拟微重力下培养的hDPSCs细胞LARG基因的mRNA表达下调(P＜0.05);微重力下RhoA-GTP、RhoA及LIMK-P蛋白表达均较对照组下调(P＜0.05).结论:模拟微重力下人牙髓干细胞细胞骨架的重排,细胞迁移能力的改变可能与RhoA/ROCK信号通路有关.
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模拟微重力对人牙髓干细胞-PLGA复合物矿化的影响
目的:研究模拟微重力(SMG)对人牙髓干细胞(hDPSCs)在聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)支架上矿化的影响.方法:采用酶消化法分离、培养人牙髓干细胞,并进行鉴定.hDPSCs常规接种于PLGA支架,24 h后,模拟微重力环境和普通环境下分别矿化诱导.矿化诱导第3、5、7、10、14天时进行碱性磷酸酶活性检测,第21天时进行茜素红染色以观察人牙髓干细胞在PLGA支架上矿化结节形成情况.结果:模拟微重力环境下的碱性磷酸酶活性明显低于普通环境(P＜0.01),茜素红染色显示模拟微重力环境下形成的矿化结节较普通环境下的小且数量少.结论:模拟微重力环境抑制hDPSCs在PLGA支架上的矿化.
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模拟微重力对人牙髓干细胞微丝及细胞迁移能力的影响
目的:探讨模拟微重力对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)微丝及迁移能力的影响.方法:利用旋转培养系统(rotary cell culture system,RCCS)将HDPSCs分为常规对照组和微重力培养组,分别于4、12、24、48、72 h行免疫荧光染色,观察微丝的变化；72 h后,透射电镜观察微丝骨架变化及细胞迁移实验检测细胞迁移能力.结果:4h时即有粗大的微丝纤维束解聚,24～72 h变得模糊,紊乱,且出现多向排列趋势；实验组细胞迁移数量少于对照组(P＜0.05).结论:人牙髓于细胞微丝在模拟微重力环境下发生改变,呈时间依赖性并使细胞迁移能力降低.
