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SHIV1157ipd3N4小量多次阴道粘膜感染中国猕猴的初步研究
目的 建立R5-SHIV1157ipd3N4病毒中国猕猴阴道粘膜小剂量多次感染模型,为我国艾滋病疫苗有效性评价提供新的模型构建、应用策略.方法 选用10-20TCID50剂量的SHIV1157ipd3N4病毒阴道黏膜途径感染6只雌性中国猕猴,共感染11次,每次攻毒间隔4～7 d.定期测定血浆病毒载量和外周血CD4+:CD8+.结果 6只中国猕猴经11次病毒攻击后,均建立系统性感染,血浆病毒载量呈阳性;CD4+:CD8+均有下降.结论 初步建立了R5-SHIV1157ipd3N4中国猕猴阴道黏膜小剂量多次感染模型,为艾滋病研究提供了更接近于自然感染状态的模型建立模式.
关键词： SHIV1157ipd3N4 黏膜感染 中国猕猴 -
川西亚种猕猴Mamu-A*01等位基因的筛查
目的 对川西亚种猕猴Mamu-A*01等位基因的存在情况进行初步筛查.方法 随机筛选2007年出生的猕猴101只,股静脉采取抗凝血200 μl,提取基因组.根据Mamu-A*01等位基因的特异性序列设计引物,利用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)筛查101只猕猴Mamu-A*01等位基因的存在情况.结果 从101只猕猴中筛选到6只携带Mamu-A*01等位基因的猕猴,但扩增所得到的序列与印度猕猴对应序列的同源性只有96%.结论 在川西亚种猕猴群内存在Mamu-A*01类似等位基因,但与印度猕猴有一定的差异,其作用和功能需要进一步的研究.
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新型乙肝表面抗原中蛋白核酸疫苗在中国猕猴体内免疫原性初步研究
目的:观察乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBs)核酸疫苗在中国猕猴体内的体液和细胞免疫应答.方法:实验用中国猕猴实验组、对照组各2只,分别在第0、8、16、24、48周肌肉注射法接种核酸疫苗(pSW3891/MHBs)或对照载体(pSW3891).ELISA法检测中国猕猴血清抗-HBs,CFSE-PI染色FCM(流式细胞术)法测定中国猕猴外周血淋巴细胞HBsAg特异性增殖反应.结果:实验组中国猕猴血清抗-HBs滴度在72周达到高峰,高滴度分别为1:6 400和1:12 800,对照组抗-HBs滴度始终保持在1:50.实验组中国猕猴外周血淋巴细胞HBsAg特异性增殖反应明显增强,细胞分裂指数分别为18.64和14.70,而对照组细胞分裂指数分别为1.62和2.61.结论:建立了CFSE-PI染色流式细胞仪检测法来检测中国猕猴外周血淋巴细胞HBsAg抗原特异性增殖反应,方法创新,实用可靠.新型乙肝表面抗原中蛋白核酸疫苗pSW3891/MHBs在中国猕猴体内能产生良好的特异性体液和细胞免疫应答.
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中国猕猴CD4+CD25+ 调节性T细胞抑制抗结核分枝杆菌特异性T淋巴细胞免疫反应
目的:体外观察中国猕猴CD4+CD25+ 调节性T细胞(Tregs) 对T淋巴细胞产生的抗PPD抗原特异性扩增的影响.方法:分离 6只3月内人工感染过结核分枝杆菌卡介苗的雄性中国猕猴外周血单个核细胞(PBMCs),免疫磁珠法分选纯化出Tregs,并用PKH26红标记.将去除Tregs的剩余PBMCs标记上CFSE,然后单独或与纯化的Tregs混合,分别给予结核杆菌纯化蛋白衍生物(PPD)或CD3/CD28 单克隆抗体刺激,体外培养7 d,用流式细胞术分析含或不含Tregs的PBMCs中CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Vγ2Vδ2 T淋巴细胞对PPD抗原和CD3/CD28抗体刺激的反应.结果:PPD不仅能引起CD4+ T淋巴细胞、CD8+ T淋巴细胞扩增,而且引起Vγ2Vδ2 T淋巴细胞也发生扩增.Tregs不仅能抑制 CD3/CD28 抗体诱导的CD4+ T淋巴细胞、CD8+ T淋巴细胞和Vγ2Vδ2 T淋巴细胞的抗原非特异性扩增,而且还可抑制PPD抗原刺激引起的CD4+ T淋巴细胞、CD8+ T淋巴细胞和Vγ2Vδ2 T淋巴细胞的抗原特异性扩增.结论:中国猕猴Tregs对T淋巴细胞产生的抗结核杆菌特异性免疫反应有负调节作用.
关键词： CD4+CD25+调节性T细胞 抗结核分枝杆菌 中国猕猴 -
中国猕猴CD4+CD25+调节性T细胞对Vγ2Vδ2T细胞体外增殖的影响
目的：观察中国猕猴的CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对Vγ2Vδ2 T细胞体外增殖的影响。方法：取3只正常的无潜伏感染的中国猕猴和6只3个月内人工感染过卡介苗的中国猕猴，分离9只动物外周血单个核细胞(PBMCs)，免疫磁珠法分选纯化出Tregs。将去除Tregs的PBMCs标记CFSE后，再与Tregs混合，给予CD3/CD28抗体、HMBPP和(或)IL-2刺激，培养7 d，流式细胞术检测Vγ2Vδ2 T细胞的增殖情况。从3只正常中国猕猴分离PBMCs，经过IL-2联合HMBPP体外刺激5 d后，标记上CFSE，再与当天新鲜分离的相同动物的Tregs混合，在IL-2刺激下继续培养4 d后，流式细胞术检测Vγ2Vδ2 T细胞的增殖情况。结果：Tregs不仅抑制Vγ2Vδ2 T细胞的HMBPP抗原特异性扩增以及CD3/CD28抗体诱导的抗原非特异性扩增(t=2.571，10.430，P＜0.05)，而且以剂量依赖关系抑制IL-2联合HMBPP体外激活的Vγ2Vδ2 T细胞(F=9.880，P＜0.001)。IL-2联合HMBPP体外预激活的Vγ2Vδ2 T细胞的扩增仍然能够受到Treg的显著抑制(FTregs=29.800，FIL-2=59.290，F交互=30.410，P均＜0.001)。结论：中国猕猴的Tregs对Vγ2Vδ2T有直接的体外负调节作用。
关键词： 中国猕猴 CD4+CD25+调节性T细胞 Vγ2Vδ2T细胞
