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人结肠腺癌细胞系Caco-2单细胞层短期培养法及其评价
目的 利用丁酸建立一种短期培养人结肠腺癌细胞系Caco-2(human colon adenocarcinoma cell line)单细胞层的方法.方法 使用不同成分的含丁酸培养基培养Caco-2单细胞层,通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)和荧光黄通透量等指标,评价其完整性；通过检测碱性磷酸酶( alkaline phosphatase,AKP)活性,评价其细胞极化程度；通过RT-PCR评价其对主要药物转运蛋白表达的影响.结果 使用短期培养法获得的Caco-2单细胞层形态完整,TEER＞500 Ω·cm2,漏出标志物荧光黄表观分配系数(apparent permeability,Papp)＜5×10-5 cm/s,表明单细胞层的完整性良好.同时肠腔侧(apical,AP)AKP活性显著升高,表明单细胞层出现明显的极性分化.短期培养与21天培养所得的Caco-2单细胞层中,药物转运蛋白P-糖蛋白( P-glycoprotein,Dgp)和多药耐药相关蛋白2(muhidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的RNA表达水平基本一致.结论 含丁酸的无血清培养基可促进Caco-2单细胞层的快速形成,利用该法建立的Caco-2细胞模型符合各项指标的要求,可用于研究口服药物转运的吸收机制.
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MALDI-TOF MS在短期培养后胸腹腔积液中细菌快速鉴定的应用
目的 对临床胸腹腔积液样本进行短期培养,使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)进行细菌鉴定,以建立可用于胸腹腔积液的快速细菌检测方法.方法 收集360例细菌感染的胸腹腔积液(胸腔积液163例、腹腔积液1 97例),所有样本分为三份:一份常规培养并使用微生物鉴定仪检测;第二份直接离心集菌后用MALDITOF MS鉴定;第三份与营养肉汤混合并短期培养2h,离心洗涤后用MALDI-TOF MS鉴定.以微生物鉴定仪结果作为金标准,评估MALDI TOF MS对短期培养后胸腹腔积液中致病菌的鉴定效能.结果 MALDI-TOF MS对短期培养后两种样本的正确检出率分别为94.5％和90.9％,总的未检出率只有7.5％;单一细菌生长的样本鉴定结果与常规方法符合率达到94.1％;能从混合细菌生长的样本中准确鉴定优势菌.结论 经过短期培养后的胸腹腔积液样本,MALDI-TOFMS检出率高,结果可靠:所需时间比常规培养缩短至少12h,可为临床准确快速提供病原菌报告.
关键词： 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 短期培养 胸腹腔积液 快速鉴定
