首页 > 文献资料
-
小鼠心室肌脱细胞化细胞外基质薄片的制备和评价
心肌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)可由心肌经脱细胞处理制得,被广泛认为是一种理想的制备工程心肌的生物支架材料.然而目前的脱细胞方法尚存在不足,本研究拟联合使用经典去垢剂改良脱细胞方法,制备性能更为优良的心肌ECM薄片,以用于构建工程心肌片.用振荡切片机将包埋于低熔点琼脂糖中的成年昆明小白鼠心室肌组织沿心脏横轴切成300μm厚的薄片,随机分为正常对照组、SDS脱细胞组(0.1％ SDS处理)和改良脱细胞组(0.1％ SDS和0.5％ Triton X-100联合处理).通过总RNA和总蛋白质含量分析、HE染色和免疫荧光染色等方法评估各组的脱细胞程度和ECM成分保留状态;将改良脱细胞组ECM与小鼠胚胎干细胞源心肌细胞(murine embryonic stem cell-derived cardiomyocytes,mES-CMs)和小鼠胚胎成纤维细胞(murine embryonic fibroblasts,MEFs)共培养以检测其生物相容性.结果显示:SDS脱细胞组和改良脱细胞组ECM中残留的总RNA及蛋白质含量均低于对照组.HE染色结果显示改良脱细胞组核质去除较SDS脱细胞组更彻底.改良脱细胞组可见胶原蛋白Ⅳ和层粘连蛋白两种ECM关键成分表达量和分布接近正常心肌组织,而SDS脱细胞组中这两种蛋白明显减少且分布紊乱.mES-CMs和MEFs能存活于改良脱细胞组ECM表面12天以上并向内迁移.综上,SDS和Triton X-100联合脱细胞法制备ECM薄片效果明显,能更好地保留天然ECM成分和结构,具有良好的生物相容性.
-
心肌片对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响
目的：观测心肌片对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法：H 9 c2细胞随机分为对照组、模型组、心肌片低中高剂量组，预给药24h后，建立心肌缺血／再灌注损伤（ M I／RI）模型。检测细胞存活率，LDH释放水平，蛋白印迹法检测心肌细胞凋亡相关基因 Bax ，Bcl‐2， Caspase‐3，Cy t‐C蛋白的表达以及A M PK磷酸化水平。结果：与模型组比较，心肌片提高细胞存活率，减少LDH水平，稳定线粒体膜电位，减少Bax ，Caspase‐3以及Cyt‐C蛋白的表达，增加Bcl‐2蛋白的表达，提高Bcl‐2／Bax 的比值（ P＜0．05）。进一步研究发现，这些保护作用被A M PK 抑制剂Compound C取消。结论：心肌片能减轻心肌缺血再灌注损伤，抑制心肌细胞凋亡，其机制可能通过激活A M PK信号通路实现的。
关键词： 心肌缺血/中医药疗法 心肌片 动物 实验 大鼠 -
心肌片通过抑制NF-κB p65信号通路发挥心肌缺血再灌注损伤的保护作用
目的 观察心肌片对缺血再灌注引起的心肌损伤的保护作用,研究其分子作用机制.方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支40 min,再灌注2 h,建立心肌缺血再灌注模型.cTnT、CK-MB、IL-1、IL-6、TNF-α、MPO和ICAM-1的活性按照试剂盒说明书测定.采用蛋白质免疫印迹法检测心肌组织细胞浆和细胞核内NF-κB p65蛋白的表达情况.结果 与模型组相比,心肌片预处理减轻了心肌损伤,降低了炎症因子水平,而这些保护作用可能与阻断NF-κB p65蛋白核转移有关.结论 心肌片通过阻断NF-κB p65蛋白核转移从而减轻缺血再灌注引起的心肌炎症反应.
