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β-雌二醇对绝经后妇女肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa的激活作用
本文旨在研究雌激素对动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large-conductance Ca2+-activated potassium channels,BKCa)的作用.取绝经后女性患者手术切除物中的肠系膜动脉,应用急性酶分离法分离出肠系膜动脉平滑肌细胞,按动脉平滑肌细胞的来源分为非高血压(non-hypertension,NH)组及原发性高血压病(essential hypertension,EH)组,采用单通道膜片钳技术研究β-雌二醇(β-estradiol,β-E2)及其受体(ER)抑制剂ICI 182780对BKCa的作用.结果显示,肠系膜动脉平滑肌细胞BKa通道的开放具有电压依赖性和钙依赖性,可被IbTX所阻断.100μmol/Lβ-E2能够显著增加NH和EH组BKCa的通道开放概率(open probability,Po),且β-E2处理后NH组BKca的通道Po显著大于EH组.ICI 182780可显著抑制β-E2对BKCa通道的增强作用.以上结果提示,β-E2能够通过激活ER显著增强绝经后妇女肠系膜动脉平滑肌细胞的BKCa功能,而高血压可以削弱β-E2对动脉平滑肌细胞BKca功能的增强作用.
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人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达水平检测方法的建立
目的:建立实时荧光定量PCR检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达水平的检测方法,并构建相应质粒标准品,为进一步研究基因功能奠定基础.方法:提取人肠系膜动脉组织总RNA,采用RT-PCR方法获取sGCα、sGCβ、GAPDH基因片段,与pNID-18T vector连接,并转化到大肠杆菌DH5α细胞,通过PCR和测序鉴定重组质粒.提取含目的基因的质粒作为标准品,采用SYBR Green Ⅰ法检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达和构建标准曲线.结果:人肠系膜动脉平滑肌存在sGCα和sGCβ基因表达,质粒标准品经过PCR鉴定并测序,与数据库公布的序列完全一致,标准曲线线性关系好,相关系数R2>0.99.结论:建立了稳定的定量检测方法,并成功用于检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达,构建质粒标准品能用于后续实验.
