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蛋白激酶A对CDC25B蛋白S149与S321位点磷酸化的修饰抑制小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂
在小鼠1-细胞期受精卵,蛋白激酶A (protein kinase A,PKA)可通过磷酸化细胞分裂周期25B (cell division cycle 25B,CDC25B)的321位Ser引起受精卵分裂阻滞.本文旨在研究PKA对CDC25B 149位点Ser的磷酸化对小鼠受精卵发育的影响,及其与321位点的关系.质粒pBSK-CDC25B-WT (野生型)、pBSK-CDC25B-S149A (149位Ser突变成Ala)、pBSK-CDC25B-S321A (321位Ser突变成Ala)、pBSK-CDC25B-S 149A/S321A (149位和321位Ser联合突变成Ala)体外转录成mRNAs;显微注射入小鼠S期受精卵中,在PKA抑制剂H-89预处理的M16培养基中培养,观察其对受精卵发育、有丝分裂成熟促进因子(maturation promoting factor,MPF)活性及CDC2-Tyrl5磷酸化状态的影响.结果显示,H-89呈剂量(0～50 μmol/L)依赖性的方式加速小鼠受精卵卵裂.然后选择卵裂率接近100％、H-89 (40 μmol/L)培养的小鼠受精卵,与对照组相比,CDC25B各种mRNAs注射组受精卵卵裂率明显增高,MPF活性提前达到高峰；CDC2-Tyrl5磷酸化状态和MPF活性变化相一致,以上结果说明,CDC25B蛋白的149位Ser也是PKA在体内调控CDC25B的重要靶点.因此在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠CDC25B蛋白S149位点与S321位点的磷酸化修饰可能是控制受精卵G2/M转换的重要方式.
关键词： 细胞分裂周期25B 蛋白激酶A 有丝分裂成熟促进因子 H-89 小鼠受精卵 -
WEE1B和CDC25B蛋白核浆转位调控小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂进程
目的 通过观察内外源性蛋白激酶WEE1B和蛋白磷酸酶CDC25B在小鼠1-细胞期受精卵中不同细胞时期的定位,为深入研究WEE1B和CDC25B的核浆转位机制奠定基础.方法 对小鼠超排卵获得各期受精卵后,免疫荧光观察各期受精卵内源性WEE1B和CDC25B蛋白定位;将pEGFP-CDC25B-WT和pDsRED2-N 1-WEE1B-RFP融合质粒显微注入G1期受精卵中,观察各组小鼠1-细胞期受精卵中外源性WEE1B和CDC25B蛋白亚细胞定位.结果 在小鼠1-细胞期受精卵G2/M期转换过程中,WEE1B向细胞浆转位和CDC25B向细胞核转位.结论 WEE1B和CDC25B在小鼠受精卵G2/M转换过程中存在核浆转位的动态平衡,本研究对阐明WEE1B和CDC25B调控小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程和生殖机理具有十分重要意义.
